優(yōu)質(zhì)的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。
蓖麻凝集素(RCA)檢測(cè)試劑盒技術(shù)參考實(shí)驗(yàn)-標(biāo)本的采取和保存
可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,體液、分泌物和排泄物)等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。
蓖麻凝集素(RCA)檢測(cè)試劑盒技術(shù)參考實(shí)驗(yàn)-標(biāo)本的采取和保存
血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。如在冰箱中保存過(guò)久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。一般說(shuō)來(lái),在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過(guò)一周測(cè)定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾,澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落,所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè),宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無(wú)菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。
洗滌在ELISA過(guò)程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELISA就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)??梢哉f(shuō)在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎。
蓖麻凝集素(RCA)檢測(cè)試劑盒技術(shù)參考實(shí)驗(yàn)要點(diǎn),洗滌:洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過(guò)程如下:
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;b.用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);c.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動(dòng),浸泡時(shí)間不可隨意縮短;d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;e.重復(fù)操作c和d,洗滌3-4次(或按說(shuō)明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。
微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時(shí),可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。
?。?)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來(lái)水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗,持續(xù)沖洗2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡(jiǎn)便、快速。已有實(shí)驗(yàn)表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。
蓖麻凝集素(RCA)檢測(cè)試劑盒技術(shù)參考相關(guān)產(chǎn)品展示:hz-1887E 人C型鈉尿肽(CNP)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1888E 人阿立新A(Orexin A)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1889E 人神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1890E 人腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1891E 人乙酰膽堿(ACH)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1892E 人腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1893E 人細(xì)胞角蛋白20(CK20)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1894E 人N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1895E 人前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1896E 人細(xì)胞角蛋白13(CK-13)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1897E 人細(xì)胞角蛋白17(CK17)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1898E 人制瘤素M受體(OSMR)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1899E 人B細(xì)胞淋巴瘤因子3(Bcl3)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1900E 人癌蛋白誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄物3(OIT3)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1901E 人P27蛋白(P27)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1902E 人P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1903E 人大腸癌專一抗原3(CCSA-3)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1904E 人大腸癌專一抗原2(CCSA-2)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1905E 人大腸癌專一抗原4(CCSA-4)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1906E 人粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1907E 人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1908E 人Dickkopf 1(DKK1)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1909E 人激肽釋放酶11(KLK 11)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1910E 人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因γ/黑素瘤生激因子(GROγ/CXCL3/MGSA)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1911E 人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因β/黑素瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1912E 人美麗線蟲(chóng)凋亡基因(CED-3)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1913E 人胸腺白血病抗原(TLa)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1914E 人腫瘤特異性移植抗原(TSTA)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1915E 人足細(xì)胞標(biāo)記蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1916E 人乳腺癌易感蛋白1(BRCA-1)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1917E 人T細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1918E 人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1919E 人硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1920E 人窖蛋白(Cav-1)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1921E 人普通急性淋巴細(xì)胞白血病抗原(CALLA)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1922E 人黑色素細(xì)胞刺激素(MSH)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液
hz-1923E 人表皮角蛋白(EK)ELISA試劑盒 血清/組織/尿液