BrdU染色
服務(wù)介紹:
可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),滲入正在復(fù)制的DNA分子,活體注射或細(xì)胞培養(yǎng)加入,而后利用抗Brdu單克隆抗體,ICC染色,顯示增殖細(xì)胞。同時結(jié)合其它細(xì)胞標(biāo)記物,雙重染色。
名稱 | 規(guī)格 |
BrdU染色 | 張 |
實驗流程:
1.加破膜液破膜20min;
2.DAPI染核8min;
3.用4%的多聚甲醛固定10min;
4.用純水稀釋鹽酸(鹽酸:純水=1:7),滴加到爬片上37℃孵育40min;
5.用4%的多聚甲醛固定10min;
6.加3%BSA封閉,孵一抗4℃過夜,PBS沖洗3次;
7.孵二抗50min, PBS沖洗3次;
8.滴加一滴抗熒光淬滅封片劑封片,顯微鏡觀察。
備注:組織樣本的BRDU 染色,可以按照常規(guī)的免疫熒光流程進(jìn)行操作,不需要用鹽酸處理。細(xì)胞樣本的BRDU染色,則需要嚴(yán)格按照以上的步驟進(jìn)行。
送樣運(yùn)輸要求:
1.組織樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上,常溫運(yùn)輸送樣。
2.石蠟切片常溫保存運(yùn)輸
3.冰凍切片-20℃保存運(yùn)輸
4.細(xì)胞爬片PFA固定15min后用無菌PBS洗滌后用無菌PBS浸泡,4℃冰袋保存運(yùn)輸?shù)綄嶒炇摇?/span>
注意事項:
1.BRDU,檢測之前需動物活體注射化學(xué)試劑brdu,細(xì)胞需用化學(xué)試劑brdu處理造模,否則無陽性。