現(xiàn)貨供應(yīng):293ET細胞,ET轉(zhuǎn)化人胚腎293細胞價格產(chǎn)品經(jīng)無數(shù)次市場驗證,若出現(xiàn)質(zhì)量問題(非人為的)可無條件換貨或退貨,詳細信息:
規(guī)格:70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細胞一瓶
特點:細胞代數(shù)為4-5代左右
細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
收到“293ET細胞,ET轉(zhuǎn)化人胚腎293細胞價格”后應(yīng)如何去正確的處理:
您需要準(zhǔn)備好細胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多,但是不同的實驗室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會導(dǎo)致對細胞處理不當(dāng),或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細胞的死亡。
1) 收到細胞,*時間要鏡檢:觀察細胞形態(tài)是否正常,對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細胞密度,有疑議及時咨詢提供細胞的技術(shù)人員。由于運輸?shù)?時間或者溫度的變化,很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點不一樣,主要是貼壁牢固問題。比如293T,平時貼壁就不是很牢,在裝滿的 培養(yǎng)基瓶子里面,會發(fā)生大片的脫落,細胞聚集在一起,但是細胞生長還是正常的,通過離心收集,加以*的消化,重新打散,又可以正常的貼壁生長。
2) 當(dāng)通過上一步的觀察,細胞初步?jīng)]有任何問題時,進行下一步操作。當(dāng)收到的細胞密達到80%左右時,則處理如下:棄除瓶中大部分培養(yǎng)基,僅保留5到10mL 培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基;或更換新鮮的培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中,隨后每天觀察。細胞在低于正常生長溫度情況下,會調(diào)整為靜止期,或者慢速生*,必須恢復(fù)37 度的環(huán)境至少3個小時左右,才能重新調(diào)整到接近對數(shù)生*的狀態(tài),在對數(shù)生*進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率,和細胞的存活率。
3)如果經(jīng)*步觀察發(fā)現(xiàn)“”密度超過90%,并且細胞狀態(tài)很好時,則復(fù)溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細胞而定。對于生長比較快,狀態(tài)穩(wěn)定,不易受外界影響的細胞 可 以一次多傳幾瓶;對于生長較慢,細胞比較薄,狀態(tài)容易波動的細胞類型,一次少傳些,保證每瓶細胞密度大些,便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細胞,*次 處理也可以依照第二種情況。
售后:收到細胞后7天,如發(fā)現(xiàn)細胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,快遞運輸?shù)仍颍r,應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報告并及時傳真或致銷售人員,我們將盡快為您解決。
操作方法
固定 | 培養(yǎng)細胞的制片或冰凍切片用4%多聚甲醛固定30min(4℃)后,用80%酒精再固定2h(-20℃)。常規(guī)4%中性福爾馬林固定、石蠟包埋之切片進行脫蠟、水化。 |
洗滌 | 玻片浸入PBS緩沖液,搖床上洗滌5min,三次。 |
反應(yīng) | 洗滌后的玻片用吸水紙吸干細胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加反應(yīng)液(每50μL反應(yīng)液含TdT酶0.5μL,標(biāo)記的-dUTP 1μL),使反應(yīng)液均勻地覆蓋于所有細胞或組織切片上,蓋上塑料蓋玻片,置濕盒中,37℃孵育1h。 |
終止反應(yīng) | 去掉塑料蓋玻片,將玻片置盛有洗滌緩沖液的染色缸內(nèi),洗滌兩次,每次5min。 |
FITC標(biāo)記 | 洗滌后的玻片用吸水紙吸去細胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加FITC反應(yīng)液(含FITC 2.5μg/mL),室溫下避光孵育10min。 |
洗滌 | 將玻片置于洗滌緩沖液內(nèi),洗兩次,每次5min。 |
PI復(fù)染 | 將玻片置于盛有PI染液的染色缸內(nèi),室溫下避光染色30min。 |
封片 | 用蓋玻片直接蓋在含PI染液的玻片上,亦可用無色指甲油涂于蓋玻片四周邊緣,置暗盒中,盡早鏡檢觀察。 |
交貨時間 | 10~15天 |
客戶須知(對材料的要求、注意事項)
結(jié)果提供:正常和陽性對照玻片及其1張數(shù)碼照片,剩余石蠟塊,檢測報告;
樣本要求:取材保持組織新鮮(組織塊以小于2cm×1.5cm×0.3cm為宜),立即放入固定液中(固定液用10%福爾馬林液或4%多聚甲醛緩沖液,體積為組織塊的10倍以上),避免干燥;對于有血跡的樣本,可用PBS液或生理鹽水沖洗后直接放入固定液中;經(jīng)固定后的樣本必須在48小時內(nèi)處理。
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