操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
中文名稱：蛋白磷酸酶抑制劑混合液Ⅰ
英文名稱：Phosphotase Inhibitor Cocktail 1
產(chǎn)品規(guī)格：1mL
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號：BJ-F0164767
生物醫(yī)學實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。
產(chǎn)品介紹：
組織/細胞裂解時會釋放出大量內(nèi)源性蛋白磷酸酶，以各種方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，導致不同于正常生理狀態(tài)的差異，影響實驗結果。因此，加入外源性蛋白磷酸酶抑制劑，抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，維持蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)，是Western Blotting、免疫共沉淀檢測磷酸化蛋白質(zhì)和蛋白活性測定等研究*的一步。本產(chǎn)品就是針對這一用途開發(fā)。 產(chǎn)品特點： 1．即開即用，不需要單獨購買每個成分然后再配制。 2．由5種蛋白磷酸酶抑制劑(釩酸鈉、氟化鈉、鉬酸鈉、酒石酸鈉、咪唑)組成，各成分的濃度經(jīng)過精心優(yōu)化。 3．抑制譜廣，能特異性地抑制絲磷酸酶、蘇磷酸酶、酪磷酸酶、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和ATP酶。 4．與各種細胞裂解液兼容。 5．使用簡單，在細胞裂解液中按一定比例加入即可(根據(jù)蛋白磷酸酶決定，一般按1/100的體積比)。 6．適用于Western blot、免疫共沉淀檢測磷酸化蛋白質(zhì)、蛋白活性測定等試驗。 儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。 使用方法： 1.在臨用前溶解本產(chǎn)品，并按1/100的比例加入到細胞裂解液中(1mL細胞裂解液中加入10μl)。注意：對蛋白磷酸酶含量特別豐富的組織，可以將加入比列提高到1/20-1/50。 2.后續(xù)處理按常規(guī)方法進行即可。 注意：避免反復凍融本產(chǎn)品，所以次溶化后，如果還有剩余，可將其分裝成小份凍存，每次用多少取多少。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標本采集人員需按有關規(guī)定做好個人防護。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出。以同一拭子拭兩側鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標本。同時也將標本有關信息填在標本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標明有關信息。同一患者2份以上的密封標本，可以放在同一個二級容器內(nèi)。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險標注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(nèi)(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標本若不能在24小時內(nèi)送達，則應盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩(wěn)定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進行。
分子生物級溴化乙錠（Ethidium Bromide）染色液
（1毫克/毫升）或（10毫克/毫升）
SYBR綠色熒光核酸染色試劑盒（配制25毫升/次）
SYBR綠色熒光核酸染色（20X）
溴酚藍（BROMPHENOL BLUE）溶液（100毫克/毫升）
小鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)elisa ，英文名： TARC/CCL17 ELISA Kit
牛β羥(βOHB)ELISA檢測試劑盒BovineBeta-HydroxybyricAcid,β-OHBELISAKit 96T/48T
人8異前列(8-iso-PG)免疫試劑盒 Human 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit
英文名稱MouseIerleukin-1α,IL-1αELISAkit小鼠白介素1α(IL-1α)規(guī)格：96T/48T
冰凍切片組織CASPASE-10蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次
Ratclusterofdiffereiation8,CD8elisa大鼠CD8分子(CD8)elisa規(guī)格：96T/48T
蛋白磷酸酶抑制劑混合液Ⅰ小鼠Ⅲ(FⅢ)elisa分析檢測試劑盒
小鼠Ⅱ(FⅡ)elisa檢測試劑盒
小鼠Ⅱ(FⅡ)elisa分析檢測試劑盒
小鼠Ⅱ(F2)elisa檢測試劑盒
小鼠Ⅰ(FⅠ)elisa檢測試劑盒
注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
