Orgami(DE3)plysS大腸桿菌
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
Orgami(DE3)plysS大腸桿菌 | 1管 | 詢價 |
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Origami系列菌株是K-12細(xì)胞的衍生菌,在trxB和gor基因上同時含有突變,這使得該菌株能夠更加高效的在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)生成二硫鍵,有助于含二硫鍵蛋白的活性蛋白形成。Origami系列菌株的感受態(tài)細(xì)胞能夠用于氨芐抗性質(zhì)粒的Orgami(DE3)plysS大腸桿菌蛋白表達(dá),尤其是和pET32a載體能夠*搭配使用。pET32a載體含有thioredoxin (TRX)融合標(biāo)簽,能夠高效提升胞質(zhì)內(nèi)蛋白二硫鍵的形成。DE3是溶源性的λDE3,在lacUV5啟動子下攜帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于pET系列載體及其他T7啟動子系列載體。菌株含有的pLSs質(zhì)粒能夠產(chǎn)生T7溶菌酶,可以有效降低目的基因的基礎(chǔ)表達(dá)水平。pLySs質(zhì)粒使得該菌株具有氯霉素抗性。pLySs質(zhì)粒的起始復(fù)制位點是p15 Origin, 這使得該質(zhì)粒能夠和pUC-及pBR322-衍生的質(zhì)?;ハ喙泊?。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,Orgami(DE3)plysS大腸桿菌離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時,變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
Orgami(DE3)plysS大腸桿菌相關(guān)產(chǎn)品列表:
Actin-Tracker Green(微絲綠色熒光探針)
BCECF AM
Calcein
Calcein Blue
Calcein M
CFDA SE (細(xì)胞增殖示蹤熒光探針)
Congo Red
Cyanine 3-NHS Ester
Cyanine 5-NHS Ester
DAF-FM DA(NO熒光探針)
Dansyl chloride
Di-2-ANEPEQ
Di-8-ANEPPS