原子熒光光度計(jì)按數(shù)字[3]鍵進(jìn)入③Concentration (濃度測(cè)定模式或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)模式),選中對(duì)應(yīng)的數(shù)字來(lái)設(shè)定條件(波長(zhǎng)數(shù)目,波長(zhǎng)數(shù)值,標(biāo)準(zhǔn)溶液數(shù)目及濃度),設(shè)定完畢后點(diǎn)擊[Enter]鍵確定,所有項(xiàng)目設(shè)定完畢后按數(shù)字[0]鍵確定,等待儀器調(diào)整至準(zhǔn)備狀態(tài),此時(shí)屏幕上出現(xiàn)AUTOZERO,將盛有空白溶液的比色皿放入樣品室中,按[Start/Stop] 鍵進(jìn)行零點(diǎn)的自動(dòng)調(diào)整,自動(dòng)調(diào)零完成后,將標(biāo)準(zhǔn)溶液置于光路中,按照濃度從低到高順序依次按[Start/Stop] 鍵進(jìn)行測(cè)量,測(cè)量完畢后儀器將自動(dòng)給出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)下方有三項(xiàng)供選擇:①Process(更改標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的坐標(biāo)和觀(guān)察濃度回歸曲線(xiàn)的數(shù)據(jù));②Measure(直接進(jìn)入樣品的測(cè)量);③Print(打印濃度回歸曲線(xiàn)譜圖和數(shù)據(jù)),選中對(duì)應(yīng)的數(shù)字就可執(zhí)行相應(yīng)的功能。
原子熒光光度計(jì)光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化,即儀器有一定的準(zhǔn)確度和精確度。如Eppendorf Biophotometer的準(zhǔn)確度≤1.0%(1A)。這樣多次測(cè)試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動(dòng),都是正常的。另外,還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值,離子濃度等:在測(cè)試時(shí),離子濃度太高,也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移如TE,可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素:由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果。為了大程度減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值好在0.1-1.5A。在此范圍內(nèi)混合液不能存在氣泡,空白液無(wú)懸浮物,否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測(cè)試空白液和樣品,否則濃度差異太大;換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的小體積等多個(gè)操作事項(xiàng)。