DAS型系列雙波長低壓液相色譜分離層析系統(tǒng)適用范圍:生物化學(xué)、合成化學(xué)、天然產(chǎn)物、藥物開發(fā)、食品化學(xué)、農(nóng)業(yè)化學(xué)、化妝品、聚合物與石化等行業(yè)的科研與制備??蛇M(jìn)行離子交換層析、親和層析 凝膠過濾層析、疏水作用層析等方法,用于 蛋白質(zhì)、酶、核酸、核苷酸、多肽、(含/不含芳香族氨基酸)及其它任何有紫外吸收的生物/非生物樣品的分離分析、流動檢測,是生物分子純化的理想選擇,它具有功能多,使用簡便,經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)。小巧的設(shè)計(jì),zui大限度地節(jié)約冷庫和實(shí)驗(yàn)室的空間。
備注: 系統(tǒng)配置里的高性能雙光束紫外檢測儀的各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)要求,是用在全國藥廠的藥物出廠定量檢測之用。
DAS型系列雙波長低壓液相色譜分離層析系統(tǒng)儀器設(shè)備特點(diǎn):
蛋白質(zhì)280nm/254nm雙波長測定
蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的*、*等芳香族氨基酸。它們具有吸收紫外光的性質(zhì),其吸收高峰在280nm波長處,且在此波長內(nèi)吸收峰的光密度值與其濃度成正比關(guān)系,故可作為蛋白質(zhì)定性、定量測定的依據(jù),正因?yàn)槿绱耍?80nm處的紫外吸收法通常被用于層析系統(tǒng)中蛋白質(zhì)濃度的連續(xù)監(jiān)控。但由于各種蛋白質(zhì)的*和*的含量不同,故要準(zhǔn)確定量,必需要有待測蛋白質(zhì)的純品作為標(biāo)準(zhǔn)來比較,或且已經(jīng)知道其消光系數(shù)作為參考。另外,不少非蛋白物質(zhì)在280nm波長下也有—定吸收能力,可能發(fā)生干擾。其中尤以核酸(嘌呤和嘧啶堿)的影響更為嚴(yán)重。在280nm處的吸收比蛋白質(zhì)強(qiáng)10倍(每克),但核酸在254nm處的吸收更強(qiáng),其吸收高峰在254nm附近。核酸254nm處的消光系數(shù)是280nm處的2倍,而蛋白質(zhì)則相反,280nm紫外吸收大于254nm的吸收值。
通常:
純蛋白質(zhì)的光吸收比值:A280/A254 >> 1.8
純核酸的光吸收比值: A280/A254 << 0.5
因此蛋白質(zhì)溶液中同時(shí)存在核酸時(shí)(生物體系大多數(shù)如此),必須同時(shí)測定OD254nm,與OD280nm。然后根據(jù)兩種波長的吸收度的比值,通過經(jīng)驗(yàn)公式校正,以消除核酸的影響而推算出蛋白質(zhì)的真實(shí)含量。
蛋白質(zhì)濃度=1.45×A280-0.74×A254 (mg/ml)
此經(jīng)驗(yàn)公式是通過一系列已知不同濃度比例的蛋白質(zhì)(酵母烯醇化酶)和核酸(酵母核酸)的混合液所測定的數(shù)據(jù)來建立的。