線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)原理
線粒體在產(chǎn)生能量時(shí)會(huì)將電化學(xué)勢(shì)能儲(chǔ)存于線粒體內(nèi)膜,在內(nèi)膜兩側(cè),若質(zhì)子及其他離子濃度的不對(duì)稱分布就會(huì)形成線粒體膜電位。
線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)服務(wù)介紹
大量的研究表明線粒體與細(xì)胞凋亡密切相關(guān),其中線粒體跨膜電位(MMP)的下降,被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過(guò)程中早發(fā)生的事件之一。它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征(染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂)出現(xiàn)之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰,則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。
實(shí)驗(yàn)流程
1.細(xì)胞培養(yǎng);
2.用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡,同時(shí)設(shè)立陰性依照組合陽(yáng)性對(duì)照組,收集細(xì)胞;
3.用PBS洗滌細(xì)胞三次,收集不多于1×106的細(xì)胞;
4.取100μL10×Incubation Buffer加900μL滅菌去離子水稀釋成1×Incubation Buffer,混勻并預(yù)熱至37℃;
5.吸取500μL 1×Incubation Buffer,加入1μL JC-1,渦旋混勻配成JC-1工作液;
6.取500μL JC-1工作液將細(xì)胞均勻懸浮,37℃,5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育15~20min;
7.室溫離心(2000rpm,5min)收集細(xì)胞,用1×Incubation Buffer洗兩次;
8.吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新懸浮細(xì)胞;
9.流式細(xì)胞儀檢測(cè),分析。