實(shí)驗(yàn)操作流程:
1.轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
a.將400u去核酸酶水加入管中,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物。
b.震蕩后將試劑放在- 20攝氏度保存,使用前還需需蕩。
2。選擇合適的混合比例(1: 1-1: 2脂質(zhì)體[1體積: DNA質(zhì)量來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的ONA,電蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,再次震蕩。
3、將混合液在室溫放置10-15分鐘。
4、吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。
5、加入混合液,將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)-個(gè)小時(shí)。
6.到時(shí)后,根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液,之后加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時(shí)。
轉(zhuǎn)染 ,是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例;化學(xué)介導(dǎo)方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù);生物介導(dǎo)方法,有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。
伊萊博生物擁有豐富的研究經(jīng)驗(yàn),具備完善的系統(tǒng)化管理能力和科研服務(wù)體系。目前已自建細(xì)胞、分子、病理等實(shí)驗(yàn)平臺近1000平方米,擁有的儀器設(shè)備、細(xì)胞庫、樣本保存庫等。動物實(shí)驗(yàn)中心近1800平方米,可滿足同時(shí)飼養(yǎng)清潔級和SPF級動物。核心實(shí)驗(yàn)技術(shù)團(tuán)隊(duì)主要來自中國科學(xué)院大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)等重點(diǎn)高校及科研機(jī)構(gòu),能夠?yàn)榭蛻籼峁┭芯糠桨覆邉?、?xiàng)目實(shí)施及項(xiàng)目深度分析等方面的技術(shù)支持。公司目前參與研究項(xiàng)目已經(jīng)涵蓋心腦血管、腫瘤、內(nèi)分泌、生殖、免疫、神經(jīng)等諸多領(lǐng)域。