注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng):脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:10管/9樣
檢測(cè)方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6366
產(chǎn)品分類(lèi):輔酶Ⅱ系列
商品介紹:
測(cè)定意義: 細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的積累是脂質(zhì)合成與分解失衡的結(jié)果。脂肪酸合成增多,而氧化分解降低,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累。FAS是脂肪酸合成關(guān)鍵酶,催化乙酰和丙二酰而生成長(zhǎng)鏈脂肪酸。FAS普遍表達(dá)于各種組織細(xì)胞中,在哺乳動(dòng)物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。 測(cè)定原理 以NADPH為還原力,FAS催化乙酰CoA和丙二酰CoA生成長(zhǎng)鏈脂肪酸;通過(guò)測(cè)定NADPH的減少量,即可推算出FAS活性。 實(shí)驗(yàn)中所需儀器和用品 研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍和雙蒸水。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基顆粒 Thioglycollate Medium 300ml/袋*10
48 T 堿性測(cè)試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
500mL Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH6.0 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH6.0 常溫保存
20次 天凈沙通用型MLPA試劑盒 Single Cell RNA Amplification Kit -20℃保存
2 ug pLX304 pLX304 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
肉湯培養(yǎng)基(測(cè)磷細(xì)菌菌數(shù)) 250g
1瓶 PIEC細(xì)胞株 PIEC 低溫運(yùn)輸和保存
LIM培養(yǎng)基 LIM Medium 250g
1瓶 MDBK (NBL-1)細(xì)胞株 MDBK (NBL-1) 低溫運(yùn)輸和保存
50T 巴貝斯蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
25g 咪唑 Imidazole 常溫保存
脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒紫外分光光度法Acetyl-Histone H3(K23) 乙酰化組蛋白H3抗體 規(guī)格: 0.2ml
MAL T淋巴細(xì)胞成熟相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
AGPAT4 溶磷脂酸?;D(zhuǎn)移D抗體 0.2ml
SASS6 紡錘體組裝異常蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2ml
CMG1 毛細(xì)管形態(tài)發(fā)生蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
GABBR2/GB2 G氨基丁酸B型受體2抗體 規(guī)格: 0.1ml
IL-1RA 白介素-1受體拮抗劑抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-STXBP1(Ser515) 磷酸化神經(jīng)突觸前膜胞內(nèi)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
A2AR/Adenosine A2a receptor 苷A2A受體抗體 0.1ml
AKR1B10 醛糖還原相關(guān)蛋白質(zhì)抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Bio 標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
EFR3A EFR3A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml