注意事項(xiàng)：
盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
染色后宜盡快檢測(cè)，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)，這樣通?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
產(chǎn)品名稱：小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱：LWnt-3A細(xì)胞
貨號(hào)：LZ-X969433
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：貼壁
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價(jià)，產(chǎn)品貨期短，價(jià)格優(yōu)，售后齊全。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低 1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；
嗜熱脂肪地芽孢桿菌雪膽乙素;Dihydrocucurbi伊紅美藍(lán)瓊脂EMB人瘤病16型E7抗體
芽孢桿菌香蜂草苷;didymin培養(yǎng)基膠質(zhì)谷氨酸運(yùn)載蛋白1抗體
變異鏈球菌香葉木素-7-O-葡萄糖苷;Diosme伊紅美藍(lán)瓊脂平板EB病編碼核蛋白-3抗體
血鏈球菌新芒果苷;neomangiferin蛋白胨水內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1ECE1抗體
醋酸醋桿菌香紫蘇內(nèi)酯;clareolideKovacs氏靛基質(zhì)試劑食道癌相關(guān)基因抗體
伊氏李斯特氏菌香草酸;Vanillicacid革蘭氏染色液外基質(zhì)蛋白1抗體
英諾克李斯特氏菌夏佛塔苷;Schaftoside十六烷基基溴化銨培養(yǎng)基外胚層發(fā)育不良抗體
紅曲霉小白菊內(nèi)酯;Parthenolide乙酰培養(yǎng)基表皮生長(zhǎng)因子受體抗體
不動(dòng)桿菌熊去氧膽酸;Ursodeoxycholi綠膿菌素測(cè)定培養(yǎng)基PDP基礎(chǔ)表皮生長(zhǎng)因子受體-8抗體
食酸菌柚皮甙二氫查爾酮;Naringindi甘油早期反應(yīng)基因-1/應(yīng)急反應(yīng)生長(zhǎng)基因1抗體
短波單胞菌血根堿;Sanguinarine綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基PDP斜面限供汽運(yùn)表皮膜蛋白1抗體
多頭霉香葉木素;Diosmetin培養(yǎng)基抗內(nèi)膜抗體
掘氏疫霉仙茅苷;Curculigoside明膠生化管內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗體
煙草疫霉腺苷;Adenosine明膠培養(yǎng)基上皮粘附分子/表皮粘附分子抗體
副球菌西貝母堿;Imperialine硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基大腸埃希桿菌O抗體
LWnt-3A細(xì)胞褪黑素受體1B抗體麥冬（標(biāo)準(zhǔn)品） (R)-(-)-1,1'-Binaphthyl-2,2'-diyl hydrogenphosphate
多藥耐藥相關(guān)蛋白4抗體麥冬苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→2）-β-... 2,6-Dichloropurine
多藥耐藥相關(guān)蛋白5抗體麥冬內(nèi)酯A 2,4-Dichloroquinazoline
線粒體內(nèi)膜蛋白抗體麥冬皂苷D 9-(Chloromethyl)anthracene
質(zhì)金屬蛋白酶-8/膠原酶2抗體麥冬皂苷D(標(biāo)準(zhǔn)品) Ethyl ferulate
質(zhì)金屬蛋白酶11抗體麥冬皂苷D（標(biāo)準(zhǔn)品） CAPS
質(zhì)金屬蛋白酶-12抗體麥角甾；麥角固(標(biāo)準(zhǔn)品) Crotonoside
質(zhì)金屬蛋白酶-15抗體麥芽（標(biāo)準(zhǔn)品） Brazilin
質(zhì)金屬蛋白酶-16抗體滿山白（標(biāo)準(zhǔn)品） Sarsasapogenin
