關(guān)于食用菌接種室潔凈級別的標準大多數(shù)認為以應不超過10000級為宜即直徑90mm皿—0.5H—30min<=3個，潔凈級別高，空間雜菌數(shù)量少，肯定能提高接種的成功率，但相應的投資成本和管理維護成本也會上升，而在實際生產(chǎn)中卻很少有人能做到達一萬級的潔凈度（接種箱可達到，除外），本人根據(jù)通過對開放式接種室潔凈度進行近200次的檢測和對接種后污染情況的調(diào)查表明：以接種污染率不超過2%為設計標準，接種室潔凈度級別根據(jù)實際需要確定在10萬級至30萬級較為適宜。
      當然，接種室的潔凈級別能達到一萬級那是更好了，但適不適宜作為行業(yè)標準，還需根據(jù)行業(yè)發(fā)展水平和實際需要而定。一萬級接種室需要根據(jù)潔凈室的設計理念和標準進行設計、施工、管理、維護保養(yǎng)，還應配備相應的管理人員和設備維護人員，不是現(xiàn)有小工廠隨隨便便就可以搞好的，重要的是相對于30萬級的接種室一萬級接種室建設管理維護的成本消耗所帶來的成品率提高效益遠高于其增加的投資成本。

      通過檢測表明，在對接種室進行規(guī)范消毒后很容易達到一萬級，但我們需要的環(huán)境無菌度是在接種過程能保持這種級別狀態(tài)，即使工作人員進行非常規(guī)范的更換無菌工作服、風淋后進入接種室，其潔凈狀態(tài)也將在短短幾分種之內(nèi)急劇惡化（在無凈化設備對室內(nèi)空氣進行處理的情況下），一萬級狀態(tài)在5分鐘之后將變?yōu)槭f級，10分鐘即可達30萬級，隨著作業(yè)時間的延長空間雜菌數(shù)還將增加。即使在室內(nèi)有一定凈化設備的條件下，要想一直保持十萬級也將非常困難。曾檢測過工作人員進入接種室后工作30分鐘在不開凈化設備時的潔凈度，每個培養(yǎng)皿平均菌落數(shù)達12個/5min以上，已遠超過中國1998GMP規(guī)定的標準，無級了，但即使在這樣的條件下接種至二小時，最后的接種污染率卻也僅在0.5%左右。
    食用菌接種凈化車間的的設計一般參照微生物實驗室的標準，但物種的抗性和生產(chǎn)特性畢竟不*相同，食用菌需要的是純培養(yǎng)，但并不一定代表需要我們接入的菌物或培養(yǎng)基自身一點雜菌沒有，真正能做到這樣畢竟好，但在實際生產(chǎn)中卻很難做到都這樣，因此我們可把標準降一降，只要能保持正常生產(chǎn)，在成品能得到保證的情況下以實際需要出發(fā)來制定標準，來指導生產(chǎn)，不需要一味的去要求高。是的，也許在這樣的低環(huán)境條件下接種菌包被帶入了雜菌，但這不代表我們的菌包就污染了，不能用了，需知任何菌物都有其一定的抗性，且雜菌也并不是落地就生根，造成危害，它也需要在適合它生長的條件下才能生長發(fā)育，。其實在生產(chǎn)中有很多這樣的例子，比如毛木耳、平菇的開放式接種，普通的接種賬隨便熏熏就接種它們的接種成品率也很高，而那樣的條件恐怕得達到一了吧。
      所以我認為一般的袋式金針菇生產(chǎn)的接種室潔凈度能達到三十萬級就可滿足要求（小于等于15個/皿*30min)。

 
第二章    食用菌接種室設計的環(huán)境參數(shù)
1，凈化級別：30萬級，以菌落計平均在10~15個/皿*0.5小時（所有菌落并非都是食用菌有害菌，比如*直徑0.3~1.2微米，一部分可以通過0.5微米高效過濾器，也可在平皿上形成菌落，但它不能在普通食用菌培養(yǎng)基造成危害，即雜菌對生存環(huán)境也具有選擇性，所以具有針對性的控制食用菌危害菌才更具有現(xiàn)實意義）
2,類別：食用菌潔凈室
3,氣流狀態(tài)：亂流潔凈室，整體氣流以不均勻速度呈不平行流動，伴有回流或渦流。
4,換氣次數(shù)：5~8次/小時，總換氣數(shù)＝總風量*出風效率/接種室體積。
5,靜壓差：與相鄰環(huán)境的空氣壓力差值，不低于5帕，即接種室壓力大于緩沖間，緩沖間大于外界。
6,溫度：16~20度
7,濕度：小于90%
8,照度：一般照明，70~150lx
9,布局（人凈路線）：輔助區(qū)（貯物間,更衣室）——>接種室外走道——>人身凈化（緩沖間，更換無菌工作服，人手消毒）——>接種室
10,建筑要求：（六面光）
10.1  材料：表面光滑，耐磨，絕熱，不吸濕、透濕，易加工，表面不易附塵土，易去塵，便 宜。
10.2  地面：耐磨，耐侵蝕，易清掃，可采用水磨石，涂料，瓷磚等）
10.3  墻面：不易臟，易清潔，表面光潔，耐沖擊，可采用瓷磚，彩鋼板，防霉涂料，樹脂漆，裝配式潔凈室壁板等
10.4 吊頂：為減少投資和方便維護普通接種室可不必吊頂，施工可參考墻面。
注意：食用菌接種室所使用材料一定要注意防水，因為接種室相對濕度一般較大，且經(jīng)常需要用水擦洗和用消毒水沖洗，以防不不防材料的受潮變形或被侵蝕，需要使用石膏是一定要使用防水石膏，且不得作為罩面材料。
11,造價（僅供參考）
以辦公樓作對照  元/平方米
辦公樓  500
一萬級（生物潔凈室）：2200
十萬級（生物潔凈室）：1900
層流室（骨髓移植）：4500~7800
30萬級（食用菌接種室）：小于1200

 
第三章  設備配置
 
1,外置式空氣過濾器    9000元/臺，定做，作用：對外界新風進行過濾后送入接種室，對室內(nèi)含雜菌較多的空氣進行稀釋和補充接種室內(nèi)氧氣。
 
性能參數(shù)：
風量：1000~1500立方每小時
過濾效率：（小于等于0.5微米）99.99%  三級過濾（粗、中、高效過濾器），過濾后空氣通過PVC管道通入接種室，室內(nèi)根據(jù)接種臺分布情況，將出風口安置于正對接種操作部位，，使吹出的新風直吹或覆蓋接種外，保持局部的高潔凈度，出風口可采用散流器或自制出風口（在PVC封頭上進行均勻打孔），關(guān)于出風口吊裝位置可以有垂直和水平兩種安裝方法（垂直即出風口吹出的風向與接種臺平面垂直，水平相反），我個人認為水平出風要更好些，因為人在接種時，人手、棉塞、菌種、袋口都在上風位，垂直吹出的風易將其上粘附的雜菌直接吹入菌包內(nèi)，如是水平流則可減少許多，但在凈化遠端卻更易形成渦流（針對整筐接種）。
 
配置空間：100~150立方
阻力：小于250帕
2,臭氧機     參考價（10~12克每小時）2500~3000元每臺。自制價1500元。（需選購電源、發(fā)生片是防潮型的，箱體，冷卻風扇等要高級的話還要時間繼電器或時控開關(guān)，二極管等等）
臭氣滅菌的好處就不作多說了，自就滅菌的實際效果而言，我認為要遠遠強于目前所用的含氯及其它的化學藥劑（煙霧劑時代即將成為歷史），重要的是它效果的確不錯，使用方便，快速，分解快，對人體危害小，且不污染環(huán)境，可謂高效，廉價又環(huán)保。接種室。用于對接種室的帶包空間消毒。

 
臭氧發(fā)生量的選擇：根據(jù)凈化級別和空間大小而定
百級：20ppm
一萬級：15ppm
十萬級：10ppm
三十萬級：7ppm
（1ppm=1.96mg/m3）
臭氧需求量按以下公式自己計算：
W＝C*V/（1-S）
W：需要的臭氧量  克/小時
C：需要的臭氧濃度  毫克每立方
V：接種室體積  立方米
S：臭氣工作一小時后的自然衰減率，取0.61
建議按百級標準定購，反正增加不了多少投資，且臭氧機的發(fā)生量會隨著工作時間的延長減少，買個保險，放心。
3,自凈器  選配  參考價800~1500元每臺   對接種室內(nèi)空氣進行循環(huán)過濾，濾除室內(nèi)空氣中的雜菌粒子，也可根據(jù)需要裝配成垂直或水平流的局部凈化設備。
技術(shù)參數(shù)：
1,凈化效率：大于等于99.95%，針對0.5微米塵粒而言
2,功率：300~600W
3,電源：220V
4,風量：800~1500立方米每小時誤差20%
5,風速：0.3~0.6米每秒
6,濾材：（高效）超細玻璃纖維
7,過濾級數(shù)：二級，粗效，高效（或亞高效）兩級過濾
選配臺數(shù)
1,根據(jù)接種室大小選擇。
例設計接種室為50平方，層高3米，要求每小能進行不少于10次的循環(huán)過濾，選用風量為1000立方每小時風量的自凈器，則需自凈器臺數(shù)為：50*3*10/（1000*0.8）＝1.87,即至少需要兩臺自凈器。
2,根據(jù)操作臺數(shù)量選擇即每個操作臺配置自凈器一臺，使經(jīng)過濾后的空氣覆蓋接種區(qū)域，局部潔凈度不高于一萬級。
4,電子凈化機  選配  參考價4000元每臺，原理：段為電離段，使微粒帶電，第二段為集塵段，使帶電微粒沉積在電極板上。在電離段，放電線上加有8100V的直流正電壓，與接地電極之間形成具有很強電位差的不均勻電場。放電線周圍產(chǎn)生電暈放電，使流過的空氣電離，產(chǎn)生大量正離子和電子。電子移向放電線，正離子則附著在空氣中的微粒上，使中性微粒帶正電，然后注向集塵段。在集塵段，正、負電極板交替排列。電極板之間有均勻電場。當帶正電荷的微粒進入電場后，受庫侖力的作用，改變流向，流向并附著在負極板上。
電子式集塵器可以過濾掉10μm以下的大部分顆粒，具有空氣阻力低、積塵后阻力變化小且集塵范圍廣。電子式集塵器過濾效率取決于電場強度、塵粒大小、氣流速度等因素。
1、電子式集塵器由電離絲（區(qū)）和集塵板（區(qū)）組成。電離絲通電產(chǎn)生電暈放電現(xiàn)象（正電壓），空氣經(jīng)過電離區(qū)時被電離。
2、 集塵區(qū)由多組平行的高電壓極板和接地極板組成，空氣中被電離的顆粒經(jīng)過集塵區(qū)時，大部分被接地極板吸附。
雜菌被電離后吸附，通過高壓進行殺死，主要特點是效率高，阻力小。
選配方法同自凈器。
5,制冷系統(tǒng)     參考價不詳   為避免空氣的過于流動給接種造成污染，接種室制冷系統(tǒng)宜采用排管式蒸發(fā)器進行自然對流冷卻。當然在能保證接種室內(nèi)潔凈度在一萬級或十萬級的情況下，普通的風冷式蒸發(fā)器也可，同時也可采用潔凈室專用的潔凈空調(diào)機組（較貴）。建議采用排管式蒸發(fā)器，方案如下：
1,土法：采用地下水作冷卻介質(zhì)，使用無縫鋼管或暖氣片作冷卻蒸發(fā)器，投資省，但控溫有限。
2,如采用氨制冷，可用無縫鋼管制作成排管蒸發(fā)器通入液氨。效果好，制冷快，可利用已有設備。
3,如采用其它壓縮機組制冷的，將風冷式蒸發(fā)器改為排管式蒸發(fā)器。工質(zhì)充注量相應增加，其它改動請教專業(yè)人員。
不管采用哪種方案都必須做好防水工作，可在蒸發(fā)器下安裝接水盤，具體不述。
6,無菌工作服  選配   參考價60元每套  三十萬級接種室的宜選用分體式或大褂式無菌工作服，也可配用連體式，但穿作等較為麻煩。無菌工作服要求能阻留人體脫落物，質(zhì)地應光滑，不產(chǎn)生靜電，不脫落纖維和顆粒物。材質(zhì)一般采用：超細滌綸長絲＋導電纖維。
7,凈手器   選配  參考價400元每臺。手部消毒。
8,干手器   選配  參考價100元每臺。烘干手用。
9,其它略，門的設計。建議使用移動拉門。

接種操作規(guī)程
1  雜菌無處不在，接種是一個嚴格無菌操作的過程，是一個與雜菌作斗爭的過程，所有接種操作人員都必須要豎立嚴格的無菌操作意識，按規(guī)程要求進行接種作業(yè)。
2  熟練的接種操作技術(shù)對接種成功率有著直接影響，所有操作人員都必須盡力提高自己的接種操作技術(shù)水平。
3  接種室開放式接種的接種量對接種成功率有著較大的影響，接種量大，菌種覆蓋均勻成品率相對較高，接種人員不得貪圖簡便少接或接入不均。
4  接種室是一個與外界環(huán)境相對隔離的區(qū)域，人員要同進同出，盡量減少與外界空氣的交換。
5  進入緩沖間后更換工作服、鞋、帽，戴。在自動凈手器下噴灑酒精對雙手進行消毒后，一同進入無菌操作間開始接種作業(yè)。
6  進入無菌操作間應先開啟電子凈機對空間進行凈化作業(yè)，人員操作需在凈化機無菌區(qū)域內(nèi)進行。
7  使用預先配制好的消毒溶液對菌包進行外表消毒，一次性處理完畢待用。消毒時要注意觀察菌種有無污染或長勢異常。
8  使用75%酒精對雙手、接種工具進行擦拭消毒，接種工具擦拭后在酒精燈火焰上來回轉(zhuǎn)動灼燒3~4圈，稍冷卻。
9  將菌種拔除棉花塞，并刨去料面上0.5厘米左右的菌種，然后用接種勺將菌種刨碎（小麥粒大?。┘创蜷_菌包接入菌種。菌種必須用完一袋處理一袋，每袋菌種使用完畢后接種工具和手都必須重新消毒一次。
10  每袋菌包接入菌種三勺，大約25克。菌包接種孔必須接入菌種，如接種孔有堵塞的可用接種勺向下捅入。接入料面的菌種一定要注意分布均勻，不均勻的可適當搖動使其均勻。
11  接種中，待接種菌包的棉花塞要用右手小指和手掌將其夾住，不得放置于操作臺面上。塞回時要在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動一圈后塞入。
12  接好一筐種后，端上架子車前套環(huán)棉塞要側(cè)向壓倒，切忌壓倒時棉花塞觸碰到料面，棉花在攜帶雜菌，常壓滅菌很難將其殺滅干凈，觸碰料面易引起菌包污染。
13  接種操作要力求快速敏捷，盡量減少開袋后菌包在空間的暴露時間。
14  接種時如發(fā)現(xiàn)有菌種被污染的要將菌種袋擰緊密封，單獨放置，并重新對手和工具進行嚴格的消毒。
15  接種作業(yè)完畢后按《接種室使用規(guī)程》要求做好清潔工作。
接種室使用規(guī)程
1  接種室分為緩沖間和無菌操作間，均為潔凈區(qū)域，凡進入此區(qū)域者均需遵守本規(guī)程。
2  接種室控制溫度為18~22℃,濕度≤90%。
3  無菌操作間無新風過濾系統(tǒng)，操作人員及酒精燈燃燒所需氧氣由門縫等處進入，攜帶雜菌較多，因此與無菌操作間相鄰的冷卻間、緩沖間、過道都必須保持干凈整潔，并定期進行消毒作業(yè)。
4  無菌操作間及緩沖間每月應進行一次潔凈度的檢測，檢測方法為：將直徑9cm的培養(yǎng)皿注入PDA培養(yǎng)基15ml,滅菌冷卻凝固好后，在接種時將培養(yǎng)皿打開暴露30min后蓋上蓋，于30~35℃下倒置培養(yǎng)48h后觀察結(jié)果。
5  緩沖間設計潔凈度為30萬級，檢測結(jié)果培養(yǎng)皿平均菌落數(shù)應≤15個，無菌操作間設計潔凈度為10萬級，培養(yǎng)皿平均菌落數(shù)應≤10個。
6  進入接種室應先在緩沖間更換工作服、穿專用鞋、戴工作帽、，頭發(fā)應用工作帽帽兜兜住，不得批肩或散落。
7  進入接種室嚴禁隨便走動、打鬧、高聲談笑，不接聽和電話，接種操作時動作要輕柔、快捷。工作服、鞋、帽要勤洗勤換。
8  無菌操作間使用臭氧消毒，消毒前注意將兩端的門關(guān)閉嚴實，當菌種、菌包、藥品物件等準備妥當后即可開啟臭氧機，消毒人員在開啟臭氧機后一定要嗅到臭氧腥味并確定臭氧機正常工作后方可離開，每批次消毒時間為2小時，間隔40~60分鐘后可進入接種室進行接種作業(yè)，最長間隔時間不可超過1.5小時。
9  無菌操作間的潔凈度會隨著作業(yè)時間的延長而降低，接種操作應盡量快速敏捷，一次接種時間不宜超過兩小時。
10  機器設備是無菌操作間賴以存在的基礎，必須定期的進行維護保養(yǎng)，確保機器有效平穩(wěn)運行。臭氧機濾網(wǎng)每月清洗一次，電子凈化機過濾網(wǎng)、電場每月清洗一次，活性炭網(wǎng)每年更換一次。
11  接種室要同進同出，進出時動作要迅速，進入后馬上將門關(guān)閉，不可長時間將門打開，致使外界帶菌空氣過多的進入。接種期間嚴禁人員進出。
12  接種室兩天以上未使用，再次使用前應進行一次密閉空間消毒。保持接種室清潔，接種人員不得將與生產(chǎn)無關(guān)的物品帶入接種室。
13  接種室配備的消毒液濃度為：酒精70%~75%，甲酚5%，新潔爾滅0.1%~0.2%及按規(guī)定配備的其它消毒劑。
14  接種室每批次操作完畢后都必須做好清潔，地板、角落及軌道槽內(nèi)料渣要打掃干凈，無菌操作臺及墻壁應用抹布醮取消毒水擦洗干凈。地板用消毒水進行拖洗，拖洗后地板上的明水要用吸水拖把吸干。
15  接種室掃帚、拖把、抹布等專室專用，每日掃除的垃圾要及時清走。
16  無菌操作間冷卻盤管防水槽每月至少沖洗一次，以防灰塵、雜菌聚積，帶來污染隱患。接種室門、玻璃每半月必須擦洗一次。
電子凈化機維護保養(yǎng)規(guī)程
1  電子凈化機隨著工作時間的延長，集塵板、過濾網(wǎng)會吸附和聚積微塵、細菌，影響凈化、殺菌效果，為保證電子凈化機有效平穩(wěn)運行，應每月進行維護保養(yǎng)。
2  過濾網(wǎng)維護
2.1  擰動蓋板螺絲，將凈化機蓋板打開，抽出過濾網(wǎng)。
2.2  用清水或清潔劑水將過濾網(wǎng)浸泡15分鐘，然后沖洗干凈并晾干裝回原處。
2.3  清洗工作每月進行一次。
3  電場維護
3.1  打開凈化機蓋板，撥開擋片，按箭頭方向取出電場。
3.2  在大塑料桶內(nèi)放入適量水和清潔劑，將電場浸入水中浸泡15分鐘，然后用雙手托住電場在水中來回搖動，使聚積在電場上的臟物*掉落，不可用刷子或抹布擦洗。
3.3  電場洗凈后取出，然后用清水進行沖洗，直至目絲、集塵板上無清潔劑痕跡殘留。
3.4  清洗沖凈后的電場要站立放置，在陰涼處自然風干，不可在太陽下曝曬。
3.5  檢查目絲是否破損或彎曲、斷裂，如有更換目絲。
3.6  使用歐姆表檢測雙高壓接點與電場外殼的絕緣是否良好，如有短路現(xiàn)象應及時排除。
3.7  檢查完好后，裝回原處，蓋上蓋板即可。
3.8  電場每月清洗一次。
4  活性炭網(wǎng)的維護
4.1  取下電場蓋板，將活性炭網(wǎng)抽出。
4.2  換上新的活性炭網(wǎng)，蓋上蓋板即可。
4.3  活性炭網(wǎng)根據(jù)使用情況，每年至少更換一次。

接 種 室 消 毒 方 法
1、接種室每日分兩批進行接種，每批接種六車，人員定編為八人。
2、消毒前需先將已挑選好的菌種搬入接種室，準備好接種必須的工具、藥品。
3、合上臭氧消毒器電源，用遙控器將其開啟，聞到有臭氧腥臭味后人員方可離開。
4、遙控器使用方法：按下“開/關(guān)”鍵，臭氧發(fā)生器發(fā)出“嘟”的一聲，出風口有帶臭氧味氣體吹出，出風口內(nèi)有兩塊電板顯現(xiàn)藍紫色光芒并發(fā)出“吱吱”聲為正常開啟。
5、遙控器程序已預先設定好，在非正常情況下不得隨便按動其它鍵。
6、如在使用遙控器時，按下“開/關(guān)”鍵，臭氧機不工作，可按下“制熱”或“制冷”鍵。其它設定鍵請不要隨便按動。
7、臭氧機消毒時間為兩小時，消毒時間到后請在緩沖間直接將臭氧機電源切斷即可。
8、臭氧機接種室兩臺，緩沖間一臺，開啟時每臺都必須依次開啟，只有確認臭氧機正常工作后方可離開。
9、消毒人員進出緩沖間進行消毒作業(yè)進出必須將門關(guān)嚴，關(guān)閉臭氧機時，進出要迅速，盡量避免內(nèi)外空氣的大量交換。
 

 
GMP認證與臭氧
 
            中國食品產(chǎn)業(yè)網(wǎng) （2006年12月5日17:24）

              《GMP》為“Good Manufacture
            Practice(逐字漢譯為：良好生產(chǎn)規(guī)范)”一詞的縮寫，在我國制藥企業(yè)系統(tǒng)稱之為“藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范”。《GMP》作為制藥企業(yè)指導藥品生產(chǎn)和質(zhì)量管理的規(guī)范，在國際上已有40余年歷史，在我國僅有十多年歷史。
                
            藥品生產(chǎn)是一門十分復雜的科學，在從原料到成品的生產(chǎn)過程中，要涉及到許多的技術(shù)細節(jié)和管理規(guī)范。其中任何一個環(huán)節(jié)的疏忽，都可能導致藥品生產(chǎn)不符合質(zhì)量要求。也就是有可能生產(chǎn)出劣質(zhì)藥品。因此，必須在藥品生產(chǎn)全過程中進行全面質(zhì)量管理與控制來保證藥品質(zhì)量。
            實施藥品GMP是對藥品生產(chǎn)全過程進行科學的管理的有效手段，是適應WHO （word health
            organization）關(guān)于國際貿(mào)易中藥品質(zhì)量簽證體系的要求，是適應我國加入WTO后藥品生產(chǎn)企業(yè)和發(fā)展的需要。
               
            我國加入世貿(mào)組織后，其成員國的技術(shù)含金量高的產(chǎn)品打入中國市場，首先受沖擊的是那些技術(shù)工藝落后的企業(yè)。跨入二十一世紀后，人的思維、企業(yè)的經(jīng)營模式、產(chǎn)品技術(shù)含金量、信息的傳遞、區(qū)域之間的交流都將發(fā)生很大變化。如果我們企業(yè)還是停留在原來的思維觀念上，停留在現(xiàn)在的技術(shù)水平上，就有可能被市場經(jīng)濟淘汰?，F(xiàn)在是我國加入世貿(mào)組織的前夜，是藥廠進行技術(shù)改造向《GMP》靠攏的前夜，又是《GMP》認證的前夜，是機遇與挑戰(zhàn)并存的時期，企業(yè)正處在生存與發(fā)展的節(jié)點上。有資金有技術(shù)有條件的企業(yè)應迎著困難大膽探索，發(fā)揮優(yōu)勢，對內(nèi)加強管理，優(yōu)化品種。對外迅速打開并占領國際市場。即使資金、技術(shù)、條件欠缺的企業(yè)只要大膽改革創(chuàng)新，走優(yōu)化強化的路子，也可達到同樣的目的。總之，在市場競爭中，只能積極主動處于動態(tài)，而不能消極觀望處于靜態(tài)。目前企業(yè)應把相當一部分精力放在實施《GMP》上，爭取早日實施認證。
               
            近幾年來，我國實施藥品GMP的力度與速度逐年增強與加快。到目前為止，血液制品、粉針劑、大容量注射劑的生產(chǎn)已全部通過GMP認證。小容量注射劑的GMP認證工作將于2002年底完成，其它劑型藥品的GMP認證工作正逐步展開。

            同時，國家藥監(jiān)辦[2001]89號文明確提出：
                1、 2004年6月30日以前，我國藥品制劑和原料藥的生產(chǎn)必須全部符合GMP要求并取得認證證書。
                2、
            自2004年7月1日起，對凡未取得藥品制劑或原料藥GMP證書的生產(chǎn)企業(yè)，一律撤銷其《藥品生產(chǎn)許可證》或取消其相應劑型的生產(chǎn)范圍，同時撤銷其相應藥品的生產(chǎn)文號，責令其停止生產(chǎn)。

                3、 新開辦藥品生產(chǎn)企業(yè)必須取得藥品GMP證書后方可組織生產(chǎn)。
                4、 自本通知下發(fā)之日起，凡未取得相應劑開支藥品GMP證書的企業(yè)，一律不予以核發(fā)新藥和仿制藥品生產(chǎn)批準文號。
            `  
            要達到GMP認證要求，微生物的殺滅程序，而要達到這一要求，臭氧滅菌已體現(xiàn)出傳統(tǒng)的化學熏蒸、紫外燈以及加熱等方法所不可比擬的*性。

               
            由于科研院所專家教授和有關(guān)行業(yè)工程技術(shù)人員對臭氧技術(shù)應用的探討、研究，人們對應臭氧的*性已逐漸認識了解。臭氧具有消毒滅菌力強，不產(chǎn)生殘余污染，可直接對空氣、生產(chǎn)的原輔材料及設備、工作服等進行消毒滅菌的性能，在醫(yī)藥、電子、化工、光學等工業(yè)生產(chǎn)及生物制品、遺傳工程等行業(yè)中得到廣泛的應用。臭氧發(fā)生器作潔凈室微生物滅活檢測結(jié)果，驗證了臭氧滅菌的顯著效果和可靠性，清華大學李漢忠教授在《潔凈消毒劑-臭氧》論文中、軍事醫(yī)學消毒研究員劉育京教授在《在電子消毒滅菌器應用推廣會議上的報告》、第二軍醫(yī)大薛廣波教授、史江等文獻中對臭氧滅菌的效果和可靠性作出了肯定的評價。并對臭氧發(fā)生器的綜合性能給予*。
臭氧的基本性質(zhì)研究
人類通過對臭氧的研究發(fā)現(xiàn)，臭氧具有不穩(wěn)定特性和很強的氧化能力。臭氧是由一個氧分子（O2）攜帶一個氧原子（O）組成，所以它是氧氣的同素異形體。臭氧和氧氣的不同之處自表一一目了然。
表一 氧和臭氧的主要性質(zhì)
分子式 O2 O3
分子量 32 48
氣味 無 草腥味
顏色 無 淡藍色
1大氣壓，0℃時溶解度（ml/L水） 49.1 640
穩(wěn)定性 穩(wěn)定 易分解
1大氣壓，0℃時溶解度（g/L） 1.429 2.144 表一不難看出，與氧氣相比，臭氧比重大、有味、有色、易溶于水、易分解。由于臭氧（O3）是由氧分子攜帶一個氧原子組成，決定了它只是一種暫存形態(tài)，攜帶的氧原子除氧化用掉外，剩余的又組合為氧氣（O2）進入穩(wěn)定狀態(tài)。所以臭氧工作中沒有二次污染產(chǎn)生，給人類的環(huán)保需求雪中送炭，這是臭氧技術(shù)應用的*性。
臭氧的應用主要是人為的滅菌消毒。這主要是臭氧有很強的氧化能力，氧原子可以氧化細菌的細胞壁，直至穿透細胞壁與其體內(nèi)的不飽和鍵化合而奪取細菌生命，它的作用是即刻完成的，臭氧的迅速滅菌效果決定于它的高還原電位，表二列出了人們常用的消毒物質(zhì)還原電位與臭氧的比較。
表二 氧化還原電位比較
名稱 分子式 標準電極電位（伏）
臭氧 O3 2.07
過氧化氫（雙氧水） H2O2 1.78
高錳酸離子 MnO2 1.67
二氧化氯 CLO2 1.50
氯 CL2 1.36 臭氧在滅菌消毒中成就了它的四大功用：滅菌、氧化、脫色、除味。 6、臭氧的廣譜殺菌原理
臭氧幾乎對所菌、病毒、霉菌、真菌及原蟲、卵囊都具有明顯的滅活效果，且滅菌時間來說，迅速無比，是氯的300-600倍，紫外線的3000倍。臭氧的滅菌機理，臭氧可破壞病毒衣殼蛋白的四條多肽鏈并使RNA受到損傷；Kim等報告，臭氧作用過程中，可使噬菌體中RNA被釋放，電鏡觀察可見噬菌體被斷裂成小的碎片。還有人認為，臭氧可與細菌細胞壁脂類雙鍵反應，穿入菌體內(nèi)部，作用于脂蛋白和脂多糖，改變細胞的通透性，從而導致細菌溶解和死亡。
臭氧的滅菌速度和效果是的，它的高氧化還原電位決定了它對氧化、脫色、除味方面的廣泛應用，有人研究指出，臭氧溶解于水中，幾乎能夠消殺水中一切對人體有害的物質(zhì)，比如鐵、錳、鉻、硫酸鹽、酚、苯、氧化物等，還可分解有機物及滅藻等。
臭氧消毒與GMP驗證
一、GMP驗證對臭氧消毒提出的嚴格要求
GMP(藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范)于1962年首先在美國施行，自1969世界衛(wèi)生組織頒布了GMP以后，世界大多數(shù)國家都根據(jù)自己的國情制訂了本國的GMP。我國于1988年由衛(wèi)生部正式頒發(fā)了我國的GMP。這是我國藥品生產(chǎn)企業(yè)管理生產(chǎn)和質(zhì)量的基本法規(guī)，具有強制性，在我國，今后凡是沒有通過GMP驗證的藥品生產(chǎn)企業(yè)，就不能進行藥品生產(chǎn)。這是一個強大的推動力，推動著我們醫(yī)藥工業(yè)的健康發(fā)展。GMP驗證工作在衛(wèi)生部指導下，受到了藥品生產(chǎn)企業(yè)的高度重視，在我國的GMP中臭氧消毒方法是被推薦的消毒方法之一，給臭氧消毒的應用帶來了前所末有的機遇。
在制藥廠，無菌生產(chǎn)環(huán)境的提供是藥品生產(chǎn)的先決條件。也就是說在藥品的生產(chǎn)中，所采用的無菌工藝必須在投產(chǎn)之前，就通過GMP驗證。所以在GMP驗證中臭氧消毒被列入前驗證的范疇。事實上，即使在投產(chǎn)以后，對關(guān)鍵性的無菌工藝還需要進行再驗證。而且，在潔凈室還需要天天做規(guī)定的菌檢。所以說，在制藥廠，消毒是一項無處不在，無時不有的常規(guī)基礎工作。
，藥品是用來治病的，因此，它對藥檢的要求很嚴。表一是GMP中規(guī)定的藥品微生物檢查要求。
表一：藥品的微生物檢查要求
類別 劑型 含細菌量 含霉菌量 附注
固體 不含生藥原料 口服劑 <1000個/g或ml <100個/g或ml 不得檢出大腸桿菌含動物藥或臟器均不得檢出沙門氏菌、活螨
含生藥原料 片劑 <1000個/g <500個/g 
丸劑 <5000個/g <500個/g 
散劑 <100000個/g <500個/ml 
液體制劑 <100個ml <100個ml 
外用藥 眼藥 <100個/g或ml 不得有 不得檢出綠膿桿菌
陰道創(chuàng)傷用 <1000個/g或ml <100個/g或ml 不得檢出破傷風桿菌、綠膿桿菌 為了做到藥品的菌檢合格，那么，首先要求藥品生產(chǎn)的環(huán)境是合格的。在制藥廠，生產(chǎn)車間(潔凈區(qū))劃分為不同的級別。表二是GMP驗證規(guī)定的潔凈級別的要求。
表二：
潔凈級別要求
潔凈級別 塵粒數(shù)/m3 微生物數(shù)/m3 換氣次數(shù)
<0.5um >0.5um
100級 3500 O <5 垂直層流0.3m/s
水平層流O.4m/s
10000級 <3500 <2000 <100 >20次/h
100000級 <3500000 <20000 <500 >15次/h 對不同潔凈級別的潔凈室，細菌的允許值如表三所示：
表三：細菌允許值
潔凈級別 浮游值CFU/m3 表面細菌CFU/mch2 人體細菌CFU/mch2
手套 其他
100 1 3 3 5
100及10000 5 5 10(地板) 5 1O
100000 87 20 30(地板) 15   無論用什么消毒方法,都要達到上述規(guī)定，臭氧也不例外。而且，臭氧作為一種取代傳統(tǒng)消毒方法手段，人們對它的要求更高更嚴，而且要更省事，否則，就難以立足.。
二、傳統(tǒng)消毒方法的缺陷和臭氧消毒的特點
傳統(tǒng)的消毒方法主要是三種：一是紫外線消毒，二是試劑消毒，三是加熱消毒。這些方法已被大多數(shù)人們習慣使用，其安全性、可靠性已被長期的實踐所確認，人們對它們放心。但是，任何事物都有一分為二的，它們也有各自的缺陷。
紫外線消毒的主要問題在于：它穿透到力小，在紫外線照射不到的地方，消毒效果不好；其殺菌能力隨著使用時間的增加而減小，而且，燈管壽命短，更換過于頻繁，運行費用高。
化學試劑消毒，如甲醛熏蒸,操作麻煩，熏蒸時間長，有二次污染物，對人體有一定的危害，做一次甲醛重蒸需要8個小時，殘留物附著潔凈室的墻壁上，和設備的表面上，需要擦除。在消毒后的幾天內(nèi)，其懸浮粒子數(shù)會增加。
加熱*括干熱和濕熱，其缺點是溫度高，能耗大，有的物品如某些原材料，儀器儀表，塑料制品等就不宜加熱。
以上三種傳統(tǒng)消毒方法的弊端是客觀存在,但在沒有更好的方法替代之前，人們還只好用它。如果能夠做到充分發(fā)揮臭氧的優(yōu)點，彌補上述方法的缺點，就為臭氧消毒進入藥品生產(chǎn)開辟了通道。事實上，臭氧消毒確實有它許多*的優(yōu)點。
在我國的GMP驗證年里，對臭氧有一段全面的介紹：
“科學研究表明，臭氧具有強烈的殺菌作用。臭氧(03)的消毒原理是：臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧氣(02)和單個氧原子(0)；后者具有很強的活性，對細菌有*的氧化作用，臭氧氧化分解了細菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞其細胞膜，將它殺死，多余的氧原子則會自行重新結(jié)合成為普通氧分子 (02)，不存在任何有毒殘留物，故稱無污染消毒劑，它不但對各種細菌(包括肝炎病毒，大腸桿菌，綠濃桿菌及雜菌等)有*的殺滅能力，而且對殺死霉菌也很有效。”
另外，在我國衛(wèi)生部1991年頒布的“消毒技術(shù)規(guī)范”中，對臭氧的殺菌作用，使用范圍及使用方法都有明確的規(guī)定。其中，對臭氧的殺菌作用作了明確的肯定：“4.12.2殺菌作用：臭氧是一種廣譜殺菌劑，可殺滅細菌繁體和芽胞，病毒，真菌等，可破壞肉毒桿菌毒素。臭氧在水中的殺菌速度較氯快?！?br>以上這些都是我們國家的法規(guī)，很有效力，也是我們臭氧工作者進行宣傳的依據(jù)。
三、臭氧在藥品生產(chǎn)中的應用
     盡管在我國的GMP驗證中早已推薦了臭氧消毒方法，但臭氧在藥品生產(chǎn)中的應用是在近二年才開始熱起來。用得比較成功的有以下幾個方面：
1．管道容器的消毒
     在藥品生產(chǎn)中，壇壇罐罐用得很多，分別用管道閥門，儀表聯(lián)結(jié)起來，組成一個生產(chǎn)單元。對它的消毒。傳統(tǒng)方法中比較好的是用酒精浸泡。反應罐，貯存罐小的一噸半噸，大的十噸幾十噸，都要灌滿酒精，酒精用量之多可想而知。消毒完畢后，再將酒精放掉，但在轉(zhuǎn)彎抹角處，儀表閥門的接頭處，還會有酒精的殘留，去除這些殘留酒精，要用氮氣吹，直到吹干為止。酒精用量多，消毒時間長，操作過程復雜。用高壓蒸汽消毒也存在同樣的問題,都很費力。
現(xiàn)在用臭氧消毒來代替，相對來說要省事得多。具體方法是：將高濃度的臭氧直接打入管道容器，保持臭氧尾氣有一定的濃度，就可以達到消毒的的要求。因為是對管道容器進行內(nèi)表層的消毒，所以臭氧濃度要用得高一點，我們采用的設計濃度大于50ppm。蘇州黎飛制藥廠用金葡菌作培養(yǎng)試驗，結(jié)果是陰性，達到了GMP驗證的要求。
用臭氧對管道容器做消毒的優(yōu)點非常明顯，臭氧發(fā)生器可以流動使用，對不同的罐進行消毒，每個生產(chǎn)單元在每次換料前，都可以及時得到消毒，使用效率很高，很方便，不要用那么多的酒精，不要用氮氣，也不要用高壓蒸汽。所以在制藥廠就能夠得到推廣。
2．利用空調(diào)凈化系統(tǒng)對潔凈區(qū)的消毒
在制藥廠，一般來說，潔凈區(qū)面積較大，多由空調(diào)凈化系統(tǒng)完成對各潔凈區(qū)的凈化消毒。傳統(tǒng)的消毒方法是用甲醛熏蒸，如上所述，甲醛熏蒸的弊病不少，用臭氧消毒來代替是一個好方法。其方法是將臭氧發(fā)生器直接放在空調(diào)凈化系統(tǒng)的風道中，稱為內(nèi)置式臭氧發(fā)生器（HA-A型）。臭氧隨著風道的氣流，送入各潔凈區(qū)，對潔凈區(qū)進行消毒，剩余臭氧吸入回風口，由空調(diào)帶走。也可以將臭氧發(fā)生器放在空調(diào)風道的外面，將臭氧打入空調(diào)的風道中，然后送到各潔凈室，稱為外置式臭氧發(fā)生器HA-C型。外置式臭氧發(fā)生器安裝檢修方便，但制造成本要高一點。兩種方法消毒效果是一樣的。按照衛(wèi)生部消毒規(guī)范的要求，對空氣消毒的臭氧濃度是5ppm，但事實上，潔凈區(qū)的消毒不僅是對空氣的消毒，實際上還包括了物體表面的消毒，所以，我們的設計濃度為 10 ppm。每天上班前開機二小時，上班時關(guān)機，就可以保證一天內(nèi)潔凈區(qū)的浮游菌和沉降菌達到GMP的要求。
3．密閉空間的消毒
     對于空調(diào)凈化系統(tǒng)以外的潔凈室，或需要消毒的其他房間則需要單獨進行消毒處理。方法是選用移動式臭氧發(fā)生器（HA-B型），直接安裝在該房間內(nèi)。根據(jù)需要設定消毒時間，消毒結(jié)束便自動關(guān)機，所以使用非常方便。
對于有潔凈度要求的房間，機內(nèi)裝有過濾器，使臭氧發(fā)生器具有自潔凈功能。臭氧濃度按10-20 ppm設計。按房間空間體積的大小選型使用。只要滿足臭氧濃度的要求，就可以達到消毒的目的。比用化學試劑對房間的熏蒸要省事得多。
4．物品的表面消毒
在藥品生產(chǎn)的過程中，常常要對原材料，工器具，包裝物等進行表面消毒，常常使用消毒柜，傳遞窗等。傳統(tǒng)的方法是用紫外線消毒。問題主要是在于消毒不*，所以，若使用在諸如傳遞窗等要求不高的場合是可以的。但遠不如臭氧的效果好。用臭氧發(fā)生器做成的消毒柜（HB型）在制藥廠是深受歡迎的。只要不怕臭氧腐蝕的東西都可以放在柜內(nèi)進行消毒。臭氧濃度可以設計得高一點，取到100 ppm以上，只要十幾分鐘就可以達到設計要求。
5．藥廠用水的消毒
在制藥廠用水的地方較多，有醫(yī)藥用水，消毒用水，清洗用水及飲用水等區(qū)別。根據(jù)不同的水質(zhì)要求，采用不同的工藝流程，消毒工藝則用一般的臭氧水處理方法即可達到滿意的效果。這里就不再詳細介紹了。
需要特別注意的是科研注射液用水，則要求不能存在熱源。熱源是細菌病毒死亡之后留下來的內(nèi)毒素。臭氧能不能消除熱源，有待進行研究確定。如果確定臭氧可以除去水中的熱源，那么，臭氧在藥品生產(chǎn)中的應用又可以開辟一條新的途徑。
以上，僅從幾個方面介紹了臭氧在藥品生產(chǎn)中的應用實例，可以看出在藥品生產(chǎn)中臭氧是大有作為的。GMP驗證為臭氧技術(shù)的應用提供了廣闊的機遇。我們一定要抓住這個機遇，在新的研究課題上有所突破，臭氧工作者的責任是制造出性能穩(wěn)定可靠的精品臭氧發(fā)生器，為藥品生產(chǎn)服務，造福人類，那么我們?yōu)榇蟊姷慕】涤肿隽烁佑幸娴墓ぷ鳌?br>四、臭氧在制藥行業(yè)中應用標準及驗證方法
1． 臭氧在制藥行業(yè)中應用的濃度標準
臭氧對空氣中的微生物的滅活濃度和對物體表面沉降的微生物的滅活濃度。根據(jù)衛(wèi)生部1991年12月頒布的《消毒技術(shù)規(guī)范》第4.12臭氧應用章節(jié)中第8.2款空氣消毒中規(guī)定“對密閉的空氣用5～10mg/m3濃度（相當于2.5～5ppm）的臭氧作用30分鐘；對物體表面的沉降菌落需要20～30mg/m3，（相當于10～15ppm）”。制藥行業(yè)應用臭氧的目的是用來替代紫外線和化學薰蒸。對整個潔凈區(qū)空氣及機械設備、介質(zhì)材料表面的沉降菌落進行大消毒。確定的臭氧濃度為10～15ppm，相當于每立方空氣中臭氧含量20～30mg。
2．臭氧應用量的計算方法
設：V1為潔凈區(qū)空間體積，V2為HVAC系統(tǒng)空間體積，V3為保持潔凈區(qū)正壓所補充的新風對臭氧造成的損失。
則滅菌空間的總體積（V）計算為： V=V1+V2+V3
V3的確定：根據(jù)若干使用臭氧發(fā)生器消毒滅菌的廠家實踐，歸納出較為可靠的經(jīng)驗公式如下：V3≈HVAC系統(tǒng)循環(huán)總風量m3/h×25%（常規(guī)新風更換率）×10-20%（保持潔凈區(qū)正壓補充的新風量）×39%（計算應用臭氧時臭氧半衰期的預算值），即V3=HVAC系統(tǒng)循環(huán)總風量×1～2%。
V2的確定：根據(jù)若干使用臭氧發(fā)生器消毒滅菌的廠家實踐，歸納出較為可靠的經(jīng)驗公式如下：V2≈潔凈區(qū)空間體積（V1）×20-25%
臭氧發(fā)生器的選擇：先按臭氧滅菌的效率，即參照《消毒技術(shù)規(guī)范》的標準確定臭氧滅菌的濃度（C）：對空氣中浮游菌，臭氧滅菌濃度為2.5～5ppm；對物體表面的沉降菌落，濃度為10～15ppm（臭氧滅菌濃度參考衛(wèi)生部1991年12月《消毒技術(shù)規(guī)范》）。臭氧的自然半衰期（S），參比狀態(tài)下為23min左右，一個小時的衰退率約為61%；設計：應用臭氧滅菌60min時達到要求濃度后，繼續(xù)保持一段時間（1～1.5小時），即可得到機械設備和建筑物體表面沉降菌落*殺滅的作用，達到化學薰蒸大消毒的效果。
例：滅菌空間總體積(V)為1000m3，滅菌要求為替代化學薰蒸大消毒，對設備和建筑物體表面沉降菌落進行滅菌。按照上述要求空氣中臭氧濃度(C)應達到10ppm以上（在工作狀態(tài)下，折算為19.63mg/m3），臭氧發(fā)生器工作一個小時后臭氧自然衰退率(S)為61%，需選擇機器臭氧發(fā)生量g/h(W)：
W = C V / (1-S) = 19.63 × 1000 / (1-61%) ≈ 50.33(g/h)
這樣的氣流需臭氧發(fā)生量為50.33g/h，可選擇每小時產(chǎn)量為50g的臭氧發(fā)生器。
3． 臭氧濃度的測試方法
對空氣中臭氧濃度的測試，目前我國使用的有碘量法和紫外線吸收法兩種。
·碘量法在我國建設部發(fā)布的《臭氧發(fā)生器臭氧濃度、產(chǎn)量、電耗的測量》一文中，作為行業(yè)標準文件，已詳細介紹了測試方法。該方法特點是無需配套貴重儀器設備，操作方便，但易受其它氧化劑的影響而降低測試精度。
·紫外吸收法是國內(nèi)外廣泛使用的一種方法，美國就是以紫外吸收法來測試較高濃度的臭氧，作為大氣測定的標準方法。它是利用臭氧對波長為245nm紫外光的吸收，再以光度計來測量動態(tài)流動系統(tǒng)中的臭氧濃度。儀器內(nèi)設置微動泵，使用時只需將φ6mm的采樣管插入被測容器，使儀器吸入樣氣，即可顯示出臭氧濃度（ppm或mg/m3）。操作方便，精度高，重復性能穩(wěn)定，但儀器售價較高。
4．我們做臭氧滅菌模擬報告的目的
根據(jù)用戶提供的數(shù)據(jù)配制臭氧發(fā)生器，做出臭氧滅菌驗證的模擬報告，用戶按模擬報告的條款進行逐項驗證，記錄于報告中，檢驗我們的模擬報告數(shù)據(jù)是否符合用戶驗證報告。
我們做臭氧滅菌模擬報告的目的:
1、讓用戶在編制GMP認證文件時有個參考；
2.、以驗證報告中的數(shù)據(jù)衡量我們設計臭氧的用量和臭氧發(fā)生器設備的質(zhì)量以及臭氧的滅菌效果；
3、作為設備檔案存檔,便于更好的向客戶提供的優(yōu)質(zhì)服務。
國家標準（GB/T18883-2002）規(guī)定的室內(nèi)所允許的臭氧濃度值為0.16mg/m3（0.08ppm）,即滿足勞動保護要求。
生產(chǎn)中可以通入新風稀釋或保留有足夠的時間進行衰減，
由于臭氧是一種強氧化劑，具有強氧化性，它和很多物質(zhì)都發(fā)生反應，主要包括臭氧的自然衰減，臭氧與接種室內(nèi)墻壁、菌包或其它物質(zhì)的反應等都可加快臭氧的分解，為加快其分解速度或進行稀釋、驅(qū)逐，眾多方法還有待于行業(yè)人員集思廣益，方法總比問題多，沒有一項東西的應用是的，這需要我們的改進或革新。