血球計數(shù)板
,是指—種常見的生物學(xué)工具。用以對人體內(nèi)紅、白細胞進行顯微計數(shù),也常用于計算一些細菌、真菌、酵母菌等微生物的數(shù)量。是一塊特制的厚型載玻片,載玻片上有四個凹槽,構(gòu)成三個平臺。中間的較寬平臺被一短橫槽分隔成兩半,每個半邊上面各刻有一小方格網(wǎng),每個方格網(wǎng)共分九個大格,的一大格作為計數(shù)用,稱為計數(shù)區(qū)。
計數(shù)區(qū)的刻度有兩種:一種是計數(shù)區(qū)分為16個大方格(大方格用三線隔開),而每個大方格又分成25個小方格;另一種是一個計數(shù)區(qū)分成25個大方格(大方格之間用雙線分開),而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造,它們都有一個共同特點,即計數(shù)區(qū)都由400個小方格組成。
注意事項:
1.鏡檢計數(shù)室。因前一次清洗不到位,或者保存過程中存在污染,更或者因操作不當(dāng)導(dǎo)致的計數(shù)室存在劃痕,若不及時清洗或更換,則會對后期實驗計數(shù)產(chǎn)生極大影響。所以,在每次使用血球計數(shù)板之前都需要加一步鏡檢計數(shù)室,如若在鏡檢時發(fā)現(xiàn)計數(shù)室有污物,則需按要求清洗并吹干后再進行實驗。
2. 搖勻后取液。在吸出培養(yǎng)液進行計數(shù)之前,需輕輕震蕩試管,使菌體分布均勻,防止聚沉淀,從而提高計數(shù)的代表性和準確性。
3. 先蓋血蓋片后加菌液。在菌懸液搖勻后,應(yīng)先在血球計數(shù)板上蓋上血蓋片,再用滴管吸取少許菌懸液,從計數(shù)區(qū)中間平臺沿血蓋片的上邊緣滴入一小滴菌懸液,利用液體的表面張力一次性充滿計數(shù)區(qū)。若先加菌液再覆蓋血蓋片,則容易因為菌液加入過多,而導(dǎo)致血蓋片未與血球計數(shù)板支持柱接觸,血蓋片浮于菌液上方而導(dǎo)致計數(shù)偏大,同時會因為有氣泡產(chǎn)生而導(dǎo)致計數(shù)偏小。
4. 靜置片刻再計數(shù)。靜置5 min,待菌懸液不再漂浮流動,酵母菌全部沉降后再將血球計數(shù)板放到顯微鏡下進行計數(shù)。先在低倍鏡下找到需要觀察計數(shù)的大方格及中方格,將中方格移到視野,然后撥動轉(zhuǎn)換器移至高倍鏡進行計數(shù)。
5. 高倍鏡下調(diào)亮度。低倍鏡下,用平面鏡和小光圈,可以清晰地看到血球計數(shù)板上的酵母菌。但是,撥動轉(zhuǎn)換器換到高倍鏡后,即使是用了平面鏡和小光圈,視野里往往還是白茫茫一片,什么都看不見,這時候可以嘗試操作遮光器上的金屬遮光片進行遮光處理。因為活的酵母菌和培養(yǎng)液的折光率相近,所以要在高倍鏡下將視野調(diào)得暗一些。
6.掌握計數(shù)原則。一般選擇觀察的菌液濃度控制在每個小方格內(nèi)有4或5個菌體為宜,若其濃度太高,可適當(dāng)稀釋;并采用“計上不計下,計左不計右”的計數(shù)原則。