LysoSensor Yellow/Blue DND-160 黃/藍色溶酶體熒光探針
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格(元) |
LysoSensor Yellow/Blue DND-160 | MX4316-50UL | 50µl | 583 |
產(chǎn)品描述
為滿足研究者研究活細胞內(nèi)溶酶體生成和功能的動力學(xué)特征,特此開發(fā)Lysosensor探針,一種區(qū)分酸性細胞器的熒光pH指示劑。該系列染料屬于向酸性探針,由于質(zhì)子化聚集在酸性細胞器上。這一質(zhì)子化也使得因弱堿性側(cè)鏈而封閉熒光的探針得以熒光釋放,促使熒光信號增強。因此,LysoSensor探針遇酸后熒光信號呈現(xiàn)pH依賴性的增強。
LysoSensor Yellow/Blue DND-160(黃/藍色溶酶體探針)是一種獨*-特的比率型探針,呈現(xiàn)pH依賴性的雙激發(fā)和雙發(fā)射光譜峰(見Fig 1)。然而,活細胞中這一探針僅呈現(xiàn)pH依賴的雙發(fā)射光譜(發(fā)射波長比率~450/510 nm,激發(fā)波長~365 nm)。在酸性細胞器中,LysoSensor Yellow/Blue DND-160主要呈現(xiàn)黃色熒光,而在酸性偏低的細胞器中具有藍色熒光。雙發(fā)射波長的測定允許比率成像分析在酸性細胞器比如:溶酶體或精子頂體內(nèi)的pH。其pKa值約為4.2。LysoSensor Yellow/Blue DND-160,常常簡寫成PDMPO,普遍用作海洋硅藻中二氧化硅沉積和運輸?shù)囊环N示蹤劑。
Fig 1. LysoSensor Yellow/Blue DND-160的pH依賴性光譜反應(yīng)圖(A)熒光激發(fā)光譜(B)熒光發(fā)射光譜。
本品為DMSO儲存液,濃度為1mM。用于活細胞的溶酶體染色,建議工作濃度為≥1µM,需根據(jù)實際情況做優(yōu)化調(diào)整。
產(chǎn)品特征
1) 外觀:溶液
2) 濃度:1mM in DMSO
3) 亞細胞定位:溶酶體
4) 顏色:黃色、藍色
5) 檢測儀器:熒光顯微鏡
6) Abs(nm):329,384nm [雙吸收波長,對pH敏感,見Fig 1]
7) Em(nm):440,540nm [雙發(fā)射波長,對pH敏感,見Fig 1]
保存與運輸方法
保存:≤-20oC避光干燥保存,收到貨至少12個月有效。
運輸:冰袋運輸。
注意事項
1) 整個染色過程中需注意避光。
2) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
使用前,先將本品取出回溫至室溫,并對其進行簡單低速離心使溶液降至管底。第一次使用請將本品按單次用量分裝保存,≤-20°C避光干燥保存,盡量避免反復(fù)凍融。工作濃度需根據(jù)不同的實驗要求、細胞類型、細胞或組織的膜通透性等進行優(yōu)化。
1. 工作液的配制
利用生長培養(yǎng)基或合適的緩沖液將 1mM 儲存液稀釋至工作濃度,工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。對于 Lysosensor系列溶酶體探針,推薦工作液濃度≥1µM;
【注意】:
1)為了降低探針加載過度可能引起的假陽性,建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。
2)若細胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育,會觀察到熒光信號的衰減和細胞的空泡化現(xiàn)象。
2. 染色步驟(貼壁細胞)
1)將細胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上,加入合適培養(yǎng)基,使其爬片生長。
2)待細胞生長到合適密度,吸除培養(yǎng)液,加入適量 37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基(必須完*-全覆蓋住細胞),在適合特定細胞類型的生長條件下孵育細胞30min-2h(具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定)。
3)利用不含探針的新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液,并且用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進行觀察。若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長染色時間,使得染料能聚集在溶酶體上。
3. 染色步驟(懸浮細胞)
1)離心沉淀細胞,吸除上清。
2)利用適量 37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基重懸細胞,在適合特定細胞類型的生長條件下孵育細胞30min-2h(具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定)。
3)離心,吸除染色液,加入新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。
4)用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進行觀察。若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長染色時間,使得染料能聚集在溶酶體上。
【注意】:
另一種方法,懸浮細胞可能會粘附到經(jīng) BD Cell-Tak 處理的蓋玻片上,此時,可用類似于貼壁細胞的方法進行染色。
附錄I 溶酶體探針總表
貨號 | 名稱 | Abs (nm)[1] | Em(nm)[1] | pKa |
MX4320-50UL | LysoTracker Blue DND-22 藍色 | 373 | 422 | N/A |
MX4318-50UL | LysoTracker Green DND-26 綠色 | 504 | 511 | N/A |
MX4317-50UL | LysoTracker Red DND-99 紅色 | 577 | 590 | N/A |
MX4319-50UL | LysoTracker Deep Red 遠紅 | 647 | 668 | N/A |
MX4316-50UL | LysoSensor Yellow/Blue DND-160 黃/藍色 | 329,384[2] | 440,540[2] | 4.2 |
MX4321-50UL | LysoSensor Green DND-189 綠色 | 443 | 505 | 5.2 |
[1]:在水溶性緩沖液或甲醇中測定的吸收和發(fā)射波長;在細胞環(huán)境內(nèi)數(shù)值可能會有些許差異。 [2]:雙吸收和發(fā)射波長,對pH敏感。 |
溶酶體系列探針常見問題
1. 如何選擇合適的溶酶體探針?
答:對于溶酶體定位實驗,請選擇Lysotracker系列探針,根據(jù)自身的實驗體系,結(jié)合lysotracker系列探針的熒光特征,選擇合適激發(fā)和發(fā)射波長的熒光探針。Lysotracker Blue DND-22(MX4320-50UL)探針的光量子產(chǎn)率偏低,建議在非熒光選擇受限的情況下,推薦選擇其他幾款Lysotracker探針。對于酸性細胞器(比如溶酶體)的pH測定實驗,請選擇Lysosensor系列探針。
2. 溶酶體探針染色后是否能做固定?
3. 溶酶體探針是否能用于流式分析和熒光光度計分析?
4. 溶酶體探針LysoTracker Green DND-26(MX4318-50UL) 和LysoSensor Yellow/Blue DND-160
(MX4316-50UL)的建議孵育時間多少?
LysoSensor Yellow/Blue DND-160生化試劑
LysoSensor Yellow/Blue DND-160生化試劑