人5,10亞甲基四氫*還原酶(MTHFR)ELISA試劑盒
上海裕臣生物科技有限公司代理進(jìn)口原裝\進(jìn)口分裝ELISA試劑盒,具體指標(biāo)齊全,品種多,質(zhì)量好,靈敏度高。
標(biāo)本的采集及保存
1. 血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4. 樣本處理:血清或血漿標(biāo)本*稀釋5,000倍。
注:以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周,-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存,-20℃不應(yīng)超過1個(gè)月,-80℃不應(yīng)超過2個(gè)月;標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
注:
1. 試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。 實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2. 加樣:加樣或加試劑時(shí),請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時(shí),*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間,從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用多道移液器加樣。
3. 孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4. 洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請(qǐng)精確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí),一次不要小于10μl),以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差;請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6. 反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7. 底物:底物請(qǐng)避光保存,在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。
洗板方法
1. 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
2. 自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),OD值為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。*使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析,如curve expert 1.3,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
◇ 注意事項(xiàng):
收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,儲(chǔ)存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標(biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí),-20℃可保存1個(gè)月。-70度可保存6個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加*。