色譜法中zui古老的一種,液相色譜分析是指流動相為液體的色譜技術(shù).但通過改進(jìn)填料的粒度及柱壓,經(jīng)典的液相柱色譜的基礎(chǔ)上引入了氣相色譜的塔板理論,技術(shù)上采用了高壓*,固定相和高靈敏度的檢測器,實(shí)現(xiàn)了分析速度快、分離效率高和操作自動化,這種色譜技術(shù)被稱為液相色譜法（HighperformanceliquidchromatographyHPLC中藥的成分非常復(fù)雜,以往常用的薄層色譜等方法因其精密度、準(zhǔn)確度、靈敏度、重現(xiàn)性差而不能滿足現(xiàn)代中藥的需要。液相色譜儀正是以其穩(wěn)定、可靠、的特點(diǎn)成為中藥研究的zui重要的分析方法。目前液相色譜已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生物堿、皂苷、黃酮、蒽醌、香豆素等各種中藥有效成分的測定。近年來對液相色譜監(jiān)測中藥的研究非常多,由于液相色譜集經(jīng)典液相色譜和氣相色譜的優(yōu)勢于一身,無論柱效、選擇性還是分析水平都達(dá)到或超過了,近年來對液相色譜的缺乏之處進(jìn)行了改進(jìn),使這項(xiàng)技術(shù)日臻完善。 
通過對從單味藥到復(fù)方的不同配伍、煎煮時間等的研究,中藥研究的大趨勢是全成分分析.才干發(fā)現(xiàn)中藥中化學(xué)成分的變化規(guī)律,找到中藥機(jī)理之間的有機(jī)。中藥成分繁多,且各種成分的性質(zhì)普及所有極性段、酸堿范圍。實(shí)現(xiàn)多成分分析的zui簡單途徑即在一根足夠長的色譜柱上,采用溫和的流動相,足夠久的時間內(nèi)洗脫。但這與現(xiàn)代分析要求的簡便快速相違。通過大量的應(yīng)用研究標(biāo)明,毛細(xì)管電泳在分析中藥成分,尤其在分析高極性化學(xué)成分方面有較大優(yōu)勢,分析大量的復(fù)方制劑方面顯示了較高的能力。由于毛細(xì)管幾乎不會出現(xiàn)液相色譜分析中常出現(xiàn)的柱床污染現(xiàn)象,而且用過的毛細(xì)管柱只需很短的時間進(jìn)行沖洗后,即可以進(jìn)行第二個樣品的分析,快速且分辨率很高。新興的毛細(xì)管電色譜是集液相色譜和毛細(xì)管電泳優(yōu)勢于一身的一種新型電分離微柱液相色譜技術(shù),將液相色譜的多種填料微粒移到毛細(xì)管中,以樣品與固定相間的相互作用作為分離機(jī)制,以電滲流為流動相驅(qū)動力的色譜過程。zui近,一些*的檢測儀器成功的用在液相色譜分析法上,使得液相色譜的應(yīng)用更廣泛,并充分利用快速、選擇性好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),建立更加系統(tǒng)的成分分析方法。通過與質(zhì)譜聯(lián)用、梯度洗脫、柱切換技術(shù)、配合*的檢測技術(shù),以及與分子生物學(xué)、現(xiàn)代分子藥理學(xué)相結(jié)合,必將在中藥分析中發(fā)揮很大作用。 

1 液相色譜發(fā)展近況 

主要考慮試樣的預(yù)處置和分析柱、檢測器的選擇。試樣的預(yù)處理上,液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用.日前興起的固相萃取使得許多含量低的成分得到精制提純,從而適于液相色譜的測定,而孫新國采用逆流萃取測定川芎嗪含量取得了很好的效果。中藥中有些紫外吸收弱,或無特征紫外吸收的成分,直接用液相色譜測定,其靈敏度和分離度都不盡人意,利用柱前或柱后衍生化法可使這些成分較地測定出來。對于極性大、脂溶性差物質(zhì),YWGCl8柱上不易保留,用十二烷基磺酸鈉作為離子對試劑,降低其極性,延長柱上的保管時間,取得較好的分離較果。將液相色譜和質(zhì)譜這兩個強(qiáng)有力的分析技術(shù)在線連接在一起,經(jīng)過三十年的發(fā)展已成為一項(xiàng)較為成熟的分析手段,但是從形成伊始就存在著問題:從液相色譜流進(jìn)質(zhì)譜時,流動相的變化、溶劑的組成、高溫高壓離子化的問題制約著這種聯(lián)用技術(shù)發(fā)展,大氣壓離子化接口具有去除溶劑和離子化的雙重功效,引入,使得該技術(shù)在各個領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。電噴霧離子源是一種軟電離技術(shù),一般只生成（M+H+和（M-H-兩種分子離子峰,選擇性監(jiān)測（mz190負(fù)分子離子峰,具有較高的靈敏度、準(zhǔn)確度、專一性,滿足了低濃度藥物研究的需求。由張莉等人研究的三維液相色譜法可以同步測定*和阿魏酸兩種指標(biāo)。通過實(shí)驗(yàn)證明:如果選擇合適的柱溫等色譜條件,乙醇作為反相液相色譜流動相,分析中藥及中成藥中有效成分,既平安又準(zhǔn)確。結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì),普通的檢測器難以檢測進(jìn)去,液相色譜-電化學(xué)法可以有效地測定黃連粉中僅差一個基團(tuán)的*和黃芩素的含量。樣品經(jīng)色譜柱分離后收集,再經(jīng)熒光分光光度計(jì)測熒光強(qiáng)度,影響因素多,測定復(fù)雜,改進(jìn)后的液相色譜-熒光法則可以不經(jīng)衍生化和收集分離物,只經(jīng)化學(xué)處置除雜,濃縮后直接進(jìn)樣即可。用該法測定貫葉連翹中金絲桃素的含量也取得了較好的結(jié)果。液相色譜-示差折光測*口服液中黃芪甲苷的含量也都取得了較為滿意的結(jié)果。對于只有紫外末端吸收,用紫外檢測時靈敏度低,基線易漂移,示差折光檢測其易受外界條件干擾,蒸發(fā)散射檢測器能克服以上缺乏,響應(yīng)值只與樣品質(zhì)量有關(guān),其信號相應(yīng)與質(zhì)量成正比,不同化合物,質(zhì)量相同則信號相應(yīng)基本一致。蒸發(fā)光散射檢測法是基于不揮發(fā)樣品分子對光的散射水平與其質(zhì)量成正比,與其所含基團(tuán)性質(zhì)無關(guān)。只要選擇適當(dāng)?shù)臋z測器參數(shù),便可使流動相和溶劑*氣化,不產(chǎn)生信號,而樣品中的各個組分以不揮發(fā)粒子存在,對光有散射,以被檢測出來。因此,蒸發(fā)光散射檢測器可用于含不同基團(tuán)的多組分同時分離、分析。和紫外、熒光等方法相比,蒸發(fā)光散射檢測法對不同物質(zhì)有近似相同的響應(yīng)因子, 

有利于不同比例混合物的準(zhǔn)確測定.液相色譜-蒸發(fā)光散射檢驗(yàn)法測定銀杏葉中萜類內(nèi)酯含量、紅參及育精膠囊中人參 因而不出現(xiàn)低濃度、高響應(yīng)或高濃度、低響應(yīng)的現(xiàn)象.

皂苷Rg1和Re含量和藤黃中藤黃酸含量都得到很好的結(jié)果。 

2 液相色譜的研究動向 

提高分離效率。應(yīng)用*的檢測儀器和方法,2.1 縮短分析時間.對流動相、固定相進(jìn)行調(diào)節(jié)或改變,采用梯度洗脫、柱切換技術(shù)有望解決這個問題。梯度洗脫的液相色譜法,能分析較寬極性范圍的樣品,較等度洗脫具有很大的優(yōu)勢,但對于成分更復(fù)雜、極性范圍更寬的中藥樣品則有些力不從心。多柱液相色譜法又稱多維液相色譜法。除具有梯度洗脫一樣的改變流動相濃度的優(yōu)點(diǎn)外,還可以改變固定相種類、鍵合度、粒徑、柱長、柱徑等及流動相種類、濃度等。 

LC-MS-MS法測定血漿中HIV-1蛋白酶,2.2 進(jìn)一步向自動化、智能化及聯(lián)用技術(shù)上發(fā)展。液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用在國外已成為測定低濃度生物藥品中藥物及代謝物的方法.準(zhǔn)確,血漿中殘留的內(nèi)源性組份和其他藥物不干擾測定,既節(jié)省資料又節(jié)約時間。已經(jīng)應(yīng)用于體液、血漿、血清中的藥物分析。中藥復(fù)方注射液“*”中的膽酸類物的分析采用液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜聯(lián)用,效果理想。液相色譜-核磁共振聯(lián)用在藥物分析方面的作用很不錯。新近提出的智能多柱液相色譜系統(tǒng)利用切換技術(shù)的模塊式分離性能,把樣品分塊的切換進(jìn)不同性質(zhì)的色譜柱,再用合適的流動相洗脫。全過程采用智能化控制。 

3 液相色譜在中藥分析中的應(yīng)用前景