抗菌血清的制備
實(shí)驗(yàn)試劑
1. 培養(yǎng)基：普通培養(yǎng)基
2. 其它：0.5%甲醛鹽水，0.5%石灰酸鹽水，無(wú)菌生理鹽水
實(shí)驗(yàn)設(shè)備
標(biāo)準(zhǔn)比濁管，離心機(jī)等
實(shí)驗(yàn)材料
1. 動(dòng)物：家兔
2. 菌種：傷寒桿菌H901，傷寒桿菌O901
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 抗原的制備：
標(biāo)準(zhǔn)菌株的選擇：所用的菌種傷寒桿菌H901和傷寒桿菌O901應(yīng)具有典型形態(tài)菌落及生化反應(yīng)。在生理鹽水中不發(fā)生自身凝集，與特異血清有高度凝集者可作為菌種。
2. 菌液的制備
1） 原液制備：
H菌液的制備：將合格的傷寒桿菌H菌株接種于普通瓊脂的克氏瓶或大試管內(nèi) 37℃孵育18—24小時(shí)。肉眼觀察有無(wú)雜菌生長(zhǎng)，必要時(shí)作鏡檢。用無(wú)菌甲醛生理鹽水洗下菌苔，將洗下液體裝入無(wú)菌試管內(nèi)，置37℃恒溫箱18—24小時(shí)以殺菌。得到原液。用作無(wú)菌試驗(yàn)即將菌液接種于肉湯及瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)4天，無(wú)活菌生長(zhǎng)者才可使用。
O菌液的制備：將合格的傷寒桿菌H菌株依上法培養(yǎng)后，用無(wú)菌0.5%石灰酸鹽水將菌苔洗下，洗液裝入無(wú)菌試管置于37℃溫箱中18—24小時(shí)殺菌得原液。經(jīng)檢查無(wú)菌時(shí)可以使用（如無(wú)傷寒桿菌O菌株也可用H菌株制備O抗原。即用0.5%石灰酸生理鹽水洗下H菌菌液置100℃水浴60分鐘，破壞其H抗原即為O菌液。
2） 應(yīng)用液的制備：
合格的原液用標(biāo)準(zhǔn)比濁管計(jì)算含菌落數(shù)目后，用生理鹽水稀釋至每毫升含菌10億。是為了應(yīng)用液加入適量甲醛使其為0.25%，制備好的原液及應(yīng)用液均保存在2—10℃冰箱中備用，有效期為1年。
菌液濃度的計(jì)算及稀釋法：
菌液的濃度可用麥克法倫特氏標(biāo)準(zhǔn)比濁法來(lái)測(cè)定，方法如下：
a. 分別配制1%硫酸溶液及1%氯化鋇溶液
b. 取口徑相等質(zhì)地相同的試管10支，依下表所示分別將硫酸及氯化鋇溶液加入，封固管口，注明號(hào)碼備用。
管號(hào)12345678910
1%BaCl2（ml）0.10.20.30.40.50.60.70.80. 91.0
1%H2SO4（ml）9.99.89.79.69.59.49.39.29.19.0
相當(dāng)菌數(shù)（億/ml）36912151821242730
c. 將洗下的細(xì)菌原液放入與比濁管相同的試管中并予以一定稀釋。與標(biāo)準(zhǔn)比濁管相比較，視其濁度相當(dāng)于比濁管的第幾管，然后將比濁管相當(dāng)菌數(shù)乘以稀釋倍數(shù)即可得到每毫升中所含細(xì)菌的數(shù)量。如細(xì)菌原液1：5稀釋后其濁度與第3管相當(dāng)，則原液每毫升含菌數(shù)為9ⅹ5=45億。
d. 菌液的稀釋
3．免疫方法
1） 選擇體重2—3千克的健康雄兔2—3只，由耳靜脈采血1毫升，分離血清。與進(jìn)行免疫用的細(xì)菌做凝集試驗(yàn)，測(cè)定有無(wú)天然凝集素。如無(wú)或微量時(shí)，該動(dòng)物可用于免疫。
2） 將已稀釋的抗原按以下劑量及程序注入兔耳靜脈。
日期第1天第5天第10天第15天第20天
注射劑量0.5ml、1ml1、5ml、2ml、2.5ml
3） 末次注射后7天耳靜脈采血1毫升，分離血清。用上述菌液作試管凝集試驗(yàn)，滴定抗菌血清中抗體的效價(jià)，效價(jià)在1：2000以上可放血。若效價(jià)不高可再增量注射菌液1—2次，再行試血。試血合格可頸動(dòng)脈放血（方法見(jiàn)附錄）。分離血清，加入防腐劑（如萬(wàn)分之一的硫化汞）放4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
