小鼠胰島素（INS）ELISA試劑盒基因工程試劑對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響
     免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開優(yōu)質(zhì)的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑，各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。
小鼠胰島素（INS）ELISA試劑盒HBsAg試劑特點(diǎn)（檢測(cè)模式：臨床抗體夾心法）：包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對(duì)抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位，可測(cè)得HBsAg變異樣品，提高檢測(cè)的特異性（99.98%）提高檢測(cè)的靈敏度，應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說（PEI）HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05ng/ml對(duì)ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml方法一　雙抗體夾心法
　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。
　　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。
　　　3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
　　　4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
　　　5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
　　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值： DU145（前列腺癌）  原鈣黏素1（PCDH1） *原Ⅱ（Try-Ⅱ）
Lncap（前列腺癌）  白介素2受體（IL-2R） 腺苷脫氨酶（ADA）
PC-3（前列腺癌）  皮膚T虜獲趨化因子（CTACK/CCL27） 透明質(zhì)酸酶（HAase）
MOLT-4（急性淋巴母白血?。?nbsp; 胸腎表達(dá)趨化因子（BRAK/CXCL14） 天*氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）
5637（膀胱癌）  B-淋巴趨化因子1（BLC-1/CXCL13） 酸性磷酸酶（ACP）
Raji（Burkitt's 淋巴瘤）  結(jié)締組織活化肽Ⅲ（CTAPⅢ） 葡萄糖6磷酸異構(gòu)酶（GPI）
SCaBER（膀胱鱗癌）  巨噬集落刺激因子受體（M-CSFR） 磷酸葡萄糖變位酶（PGM）
NAMALWA（Burkitt's 淋巴瘤）  免疫球蛋白A Fc段受體Ⅰ（FcαRⅠ/CD89） 亮氨酰氨基肽酶（LAP）
T24（膀胱移行癌）  免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ（FcεRⅡ/CD23） 鏈激酶（SK）
HuT78（T淋巴白血?。?nbsp; 免疫球蛋白G Fc段受體Ⅲ（FcγRⅢ/CD16） 核糖核酸酶（RNASE）
SW-13（腎上腺皮質(zhì)腺癌 ）  免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ（FcγRⅡ/CD32） 過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶（LPO）

測(cè)試劑盒檢測(cè)原理

　　　ELISA檢測(cè)試劑盒應(yīng)用定性?shī)A心免疫檢測(cè)技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國(guó)型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，分別來(lái)自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會(huì)與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長(zhǎng): 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性。