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免疫熒光顯微技術(shù)
免疫熒顯微技術(shù)的基本原理是:使熒光抗體與標(biāo)本切片中組織或細(xì)胞表面的抗原進行反應(yīng),洗滌除去游離的熒光抗體后,于熒光顯微鏡下觀察,在黑暗背景上可見明亮的特異熒光。
標(biāo)本的制作 腺苷A2A受體抗體
熒光顯微技術(shù)主要靠觀察切片標(biāo)本上熒光抗體的染色結(jié)果作為抗原的鑒定和定位。因此標(biāo)本制作的好壞直接影響到檢測的結(jié)果。在制作標(biāo)本過程中應(yīng)力求保持抗原的完整性,并在染色、洗滌和封埋過程中不發(fā)生溶解和變性,也不擴散至臨近細(xì)胞或組織間隙中去。標(biāo)本切片要求盡量薄些,以利抗原抗體接觸和鏡檢。標(biāo)本中干擾抗原抗體反應(yīng)的物質(zhì)要充分洗去,有傳染性的標(biāo)本要注意安全。
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流行性
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肺炎鏈球菌免疫熒光法還是檢測自身抗體的好工具,在自身免疫病的實驗診斷中應(yīng)用廣泛。其突出優(yōu)點是能以簡單方法同時檢測抗體和與抗體起特異反應(yīng)的組織成分,并能在同一組織中同時檢查抗不同組織成分的抗體。主要有抗核抗體、抗平滑肌抗體和抗線粒體抗體等??购丝贵w的檢測zui常采用鼠肝作核抗原,可做成冰凍切片、印片或勻漿。用組織培養(yǎng)細(xì)胞如Hep-2細(xì)胞或Hela細(xì)胞涂片還可檢出抗著絲點抗體、抗中性粒細(xì)胞漿抗體等。應(yīng)用免疫熒光技術(shù)可以檢出的其他自身抗體有抗(胃)壁細(xì)胞抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗甲狀腺球蛋白抗體、抗甲狀腺微粒體抗體、抗骨髓肌抗體及抗腎上腺抗體等。
熒光抗體技術(shù)的一種特殊應(yīng)用是流式細(xì)胞分析(flowcytometry)。在這種分析方法中檢測儀器不是熒光顯微鏡,檢測對象不是固定了的標(biāo)本,而是將游離細(xì)胞作熒光抗體特異染色后,在特殊設(shè)計的儀器中通過噴嘴逐個流出,經(jīng)單色激光照射發(fā)出的熒光信號由熒光檢測計檢測,并自動處理各處數(shù)據(jù) 。這種方法可用于檢測細(xì)胞大小、折散率、粘滯度等,更常用于T細(xì)胞亞群等的檢測。