人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒
ELISA試劑盒的基本原理就是將抗原抗體固定到特定的載體上進(jìn)行反應(yīng),并通過(guò)酶催化底物發(fā)生化學(xué)變化將抗原抗體反應(yīng)通過(guò)顏色的形式顯現(xiàn)出來(lái)。
(1)將抗原抗體反應(yīng)固相化:即試驗(yàn)中的包被環(huán)節(jié),使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機(jī)制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團(tuán)可以無(wú)選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破壞蛋白分子結(jié)構(gòu),保持其生物學(xué)特性和免疫學(xué)活性;
(2)封閉:固相吸附蛋白是非特異性的,在包被目的免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力,為了保障抗原抗體反應(yīng)的特異性,因此,包被剩余的固相表面應(yīng)該用抗原抗體反應(yīng)無(wú)關(guān)蛋白封閉。一般認(rèn)為牛血清白蛋白是zui為理想的封閉劑,也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
(3)抗原抗體反應(yīng):抗原或抗體在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)下可進(jìn)行特異的抗原抗體反應(yīng)。 (4)酶反應(yīng):酶可以通過(guò)共價(jià)鍵與抗原或抗體連接形成結(jié)合物,當(dāng)抗原抗體反應(yīng)的時(shí)候,被檢測(cè)靶目標(biāo)中也結(jié)合了酶分子。
(5)ELISA試劑盒底物反應(yīng):結(jié)合在抗原抗體中的酶分子,可以促使底物發(fā)生顏色反應(yīng),檢測(cè)人員可以裸眼觀察,可以通過(guò)顏色來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在,通過(guò)顏色的深淺判斷標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的含量,也可借用酶標(biāo)儀在適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)讀取吸光度值。
人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒的優(yōu)勢(shì):
全面——混合8種不同的常見抗原,對(duì)自身免疫性疾病進(jìn)行全面篩查。
快速——檢測(cè)時(shí)間短(~2小時(shí)),確診時(shí)間更早。
準(zhǔn)確——ELISA檢測(cè)方法,靈敏度高,特異性強(qiáng),適用性好。
質(zhì)優(yōu)——*開發(fā),高品質(zhì)及高可靠性的分析性能。
價(jià)低——國(guó)內(nèi)自生產(chǎn),符合國(guó)內(nèi)實(shí)情,降低生產(chǎn)成本
標(biāo)本的采取和保存
可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。
采取措施,避免差錯(cuò)事故的發(fā)生:創(chuàng)造一個(gè)良好的工作環(huán)境,實(shí)驗(yàn)窄工作人員應(yīng)團(tuán)結(jié)友愛(ài),相互關(guān)心,相互學(xué)習(xí),處在一個(gè)融洽和諧的氛圍中,自然心情舒暢,工作情緒高漲。再就是建立完善的質(zhì)量保證體系,在操作過(guò)程中時(shí)刻注意,將質(zhì)控貫穿到整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程,包括標(biāo)本的采集與處理、操作過(guò)程、檢驗(yàn)結(jié)果的審核、結(jié)果的登記與保存、報(bào)告單的發(fā)放等一系列的制度,明確責(zé)任,錯(cuò)誤的結(jié)果還是能夠避免發(fā)生的。
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