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CCC-SMC-1兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

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更新時(shí)間:2015-11-07 16:34:02瀏覽次數(shù):109次

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CCC-SMC-1兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)方法 
1、收到細(xì)胞,請(qǐng)查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請(qǐng)盡快。
2、收到細(xì)胞,如包裝完好,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái),顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),請(qǐng)不要打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理
3. 收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況 ,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
4,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過(guò)的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時(shí)之需。
5 、24小時(shí)后,細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過(guò)5分鐘。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁,見(jiàn)細(xì)胞脫落下來(lái),加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過(guò)稀,有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細(xì)胞 ,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無(wú)菌操作。換液時(shí),換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37度    5%CO2 培養(yǎng)
7.  收到細(xì)胞后,請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞,用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)離心收集細(xì)胞,接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養(yǎng)基參考
500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機(jī)與無(wú)機(jī)成分、激素、生長(zhǎng)因子與微量元素)、細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養(yǎng)箱中使用
大鼠胰島素瘤細(xì)胞    INS-1
鼠肝星形細(xì)胞    HSC-T6
小鼠T細(xì)胞    CTLL-2
大鼠肺泡巨噬細(xì)胞    NR8383( [AgC11x3A, NR8383.1])
小鼠單核巨噬細(xì)胞    J774A.1
幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞    YXK-21
小鼠成纖維細(xì)胞    L929
大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞    Rin-m5f
小鼠黑色素瘤細(xì)胞    B16 
小鼠白血病細(xì)胞    L1210
大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞    A7r5
大鼠肝細(xì)胞瘤細(xì)胞    H-4-II-E
小鼠結(jié)腸細(xì)胞    CT26
小鼠骨髓瘤細(xì)胞    SP2/0-S
小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞    MS1
小鼠骨髓瘤細(xì)胞    NS-1(P3/NSI/1-Ag4-1)
小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝株    PT-67
小鼠肺上皮細(xì)胞    TC-1
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化)    PC-12(Well-differentiated )
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化)    PC-12(Undifferentiated)
小鼠腎小球系膜細(xì)胞    SV40-MES-13
小鼠Lewis肺癌細(xì)胞    LLC
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢懸浮細(xì)胞(biohermes)    CHO-S
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(invitrogen)    CHO-S
倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞,二氫葉酸還原酶缺陷    CHO/dhFr-
小鼠淋巴瘤細(xì)胞    L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)
小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞    MA-891
小鼠宮頸癌細(xì)胞    U14
小鼠胰島素瘤胰島β細(xì)胞    Beta-TC-6
小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞    TM3
猴腎細(xì)胞    Marc145
小鼠白血病細(xì)胞    P388
大鼠成骨細(xì)胞    ROS1728
非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞    COS-7
小鼠胚胎細(xì)胞    NIH/3T3
小鼠黑色素瘤細(xì)胞    B16F1
大鼠腎細(xì)胞    NRK-52E
鼠肝星形細(xì)胞    CFSC-8B
鼠肝星形細(xì)胞    CFSC-2G 
人/鼠雜交骨髓瘤細(xì)胞    K6H6/B5
中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞    CHL
大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞    RBL-2H3
Human Orexin B,OX-B ELISA試劑盒
Human delta sleep-inducing peptide,DSIP ELISA試劑盒
Human 6-hydroxydopamine,6-OHDA ELISA試劑盒
Human atrial natriuretic factor,ANF ELISA試劑盒
Human myelin protein 2,p2 ELISA試劑盒
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Human pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP ELISA試劑盒
Human microtubule-associated protein 2,MAP-2 ELISA試劑盒
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Human Neurotensin,NT ELISA試劑盒
Human Neurokinins B,NKB ELISA試劑盒
Human dynorphin,Dyn ELISA試劑盒
Human enkephalin,ENK ELISA試劑盒
Human Peptide γ,Pγ ELISA試劑盒
Human C -type natriuretic peptide,CNP ELISA試劑盒
Human Orexin A ELISA試劑盒
Human neuropeptide Y,NP-Y ELISA試劑盒
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Human brain natriuretic peptide,BNP ELISA試劑盒
Human cytokeratin 20,CK20 ELISA試劑盒
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Human N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP ELISA試劑盒
Human Pro Atrial Natriuretic Peptide,Pro-ANP ELISA試劑盒 
Human cytokeratin 13,CK-13 ELISA試劑盒
Human cytokeratin 17,CK-17 ELISA試劑盒 
human oncostatin M receptor,OSMR ELISA試劑盒
human B-cell leukemia/lymphoma 3,Bcl3 ELISA試劑盒
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Human P27 protein ELISA試劑盒
Human permeability glycoprotein,P-gp ELISA試劑盒
Human colon cancer-specific antigen-3,CCSA-3 ELISA試劑盒
Human colon cancer-specific antigen-2,CCSA-2 ELISA試劑盒
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Human mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA試劑盒
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Human Kallikrein 11,KLK 11 ELISA試劑盒 
Human growth-regulated oncogeneγ/melanoma growth stimulating activity,GROγ/MGSA ELISA試劑盒
Human growth-regulated oncogeneβ/melanoma growth stimulating activity,GROβ/MGSA ELISA試劑盒
Human caenorhabditis elegans death gene,CED-3 ELISA試劑盒
Human thymus-leukemia antigen,TLa ELISA試劑盒
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Human Podocalyxin,PCX ELISA試劑盒
Human breast cancer susceptibility protein 1,BRCA-1 ELISA試劑盒
Human T-cell acute lymphoblastic leukemia antigen,TALLA-1 ELISA試劑盒
Human Argyrophilic nucleolar organizer region proteins,Ag-NORs ELISA試劑盒
Human Thioredoxin,Trx ELISA試劑盒
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Human cytokeratin fragment antigen 21-1,CYFRA21-1 ELISA試劑盒
Human carbohydrate-deficient transferrin,CDT ELISA試劑盒
Human desmogleins 1,DGS-E1 ELISA試劑盒
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Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA試劑盒
Human nonsmall cell lung cancer/Lung tumor Antigen,LTA ELISA試劑盒
Human tumor marker DR-70 for lung cancer,DR-70TM ELISA試劑盒
Human fetal sulfoslycoprotein antigen,FSA ELISA試劑盒
Human Bence-Jones protein,BJP ELISA試劑盒
Human Carcinoembryonic Ferritin,CEF ELISA試劑盒
Human squamous cell carcinoma related antigen,SCCAg ELISA試劑盒
Human tumor specific antigen,TSA ELISA試劑盒
Human melanoma metastasis surface adhesion molecule,MMSAM ELISA試劑盒 
Human breast cancer susceptibility protein 2,BRCA-2 ELISA試劑盒
Human apoptosis signal regulating kinase 1,ASK-1 ELISA試劑盒
Human apoptosis signal regulating kinase 1,ASK-1 ELISA試劑盒
Human Bcl-2 associated X protein, Bax ELISA試劑盒
Human Transfer factor,TF ELISA試劑盒
Human Colon Cancer Antigen,CCA ELISA試劑盒
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Human c-myc Oncogene product,c-myc ELISA試劑盒
Human Mothers against decapentaplegic homolog 1,Smad1 ELISA試劑盒
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Human tumor-associated antigen,TAA ELISA試劑盒
Human TGF-beta-inducible early response gene-1,TIEG1 ELISA試劑盒
Human tumor angiogenesis factors,TAF ELISA試劑盒
Human cytokeratin 20,CK-20 ELISA試劑盒
Human cytokeratin 19,CK-19 ELISA試劑盒
Human cytokeratin 18,CK-18 ELISA試劑盒

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