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K562細(xì)胞人紅白血病細(xì)胞

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更新時(shí)間:2015-11-10 12:02:15瀏覽次數(shù):394次

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K562細(xì)胞人紅白血病細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)方法 
1、收到細(xì)胞,請(qǐng)查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請(qǐng)盡快。
2、收到細(xì)胞,如包裝完好,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過程中的問題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),請(qǐng)不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理
3. 收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況 ,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
4,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時(shí)之需。
5 、24小時(shí)后,細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過5分鐘。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁,見細(xì)胞脫落下來,加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過稀,有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細(xì)胞 ,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時(shí),換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37度    5%CO2 培養(yǎng)
7.  收到細(xì)胞后,請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞,用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)離心收集細(xì)胞,接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養(yǎng)基參考
500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機(jī)與無機(jī)成分、激素、生長(zhǎng)因子與微量元素)、細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養(yǎng)箱中使用
牛I型膠原(ColI)檢測(cè)試劑盒
牛γ干擾素(IFN-γ)檢測(cè)試劑盒
牛白細(xì)胞介素2(IL-2)檢測(cè)試劑盒
?;罨兀ˋCV)檢測(cè)試劑盒
牛抑制素(INH)檢測(cè)試劑盒
牛骨鈣素(OCN)檢測(cè)試劑盒
牛腫瘤壞死因子α(TNF-α)檢測(cè)試劑盒
牛白細(xì)胞介素6(IL-6)檢測(cè)試劑盒
牛卵泡抑素(FS)檢測(cè)試劑盒
牛丙酮檢測(cè)(acetone)檢測(cè)試劑盒
牛口蹄疫檢測(cè)抗體檢測(cè)試劑(O型)檢測(cè)試劑盒
牛病毒性腹瀉抗體(BVDAb)檢測(cè)試劑盒
牛病毒性腹瀉抗原(BVDAg)檢測(cè)試劑盒
牛胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)檢測(cè)試劑盒
牛白細(xì)胞介素1(IL-1)檢測(cè)試劑盒
牛溶菌酶(Lysozyme)檢測(cè)試劑盒
牛流行熱病毒抗體EFV-Ab檢測(cè)試劑盒
牛β-羥基丁酸Βhb檢測(cè)試劑盒
??偪寡趸芰-AOC檢測(cè)試劑盒
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牛肺炎支原體抗體(Mycoplasma-Ab)檢測(cè)試劑盒
牛三碘甲狀腺原氨酸(T3)檢測(cè)試劑盒
牛口蹄疫亞1型抗體(FMD1-Ab)檢測(cè)試劑盒
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犬傳染性犬肝炎病毒ICHV檢測(cè)試劑盒
犬瘟熱病毒抗體(CDV)檢測(cè)試劑盒
犬狂犬病毒抗原RV-Ag檢測(cè)試劑盒
狂犬病病毒RV檢測(cè)試劑盒
犬細(xì)小病毒CPV檢測(cè)試劑盒
牛甲狀腺素(T4)檢測(cè)試劑盒
羊口蹄疫檢測(cè)抗體檢測(cè)試劑(O型)檢測(cè)試劑盒
牛維生素B12(VB12)檢測(cè)試劑盒
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