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生理生化試驗
微生物生化反應是指用化學反應來測定微生物的代謝產物,生化反應常用來鑒別一些在形態(tài)和其它方面不易區(qū)別的微生物。因此微生物生化反應是微生物分類鑒定中的重要依據之一。
微生物檢驗中常用的生化反應有:
1、尿素酶(Urease)試驗
有些細菌能產生尿素酶,將尿素分解、產生2個分子的氨,使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性,酚紅呈粉紅色。尿素酶不是誘導酶,因為不論底物尿素是否存在,細菌均能合成此酶。其活性zui適pH為7.0。
試驗方法:挑取18~24h待試菌培養(yǎng)物大量接種于液體培養(yǎng)基管中,搖均,于36±1℃培養(yǎng)10,60和120min,分別觀察結果?;蛲坎疾⒋┐探臃N于瓊脂斜面,不要到達底部,留底部作變色對照。培養(yǎng)2,4和24h分別觀察結果,如陰性應繼續(xù)培養(yǎng)至4天,作zui終判定,變?yōu)榉奂t色為陽性。
2、氧化酶(Oxidase)試驗
氧化酶亦即細胞色素氧化酶,為細胞色素呼吸酶系統的終末呼吸酶,氧化酶先使*氧化,然后此氧化型*再使對苯二胺氧化,產生顏色反應。
試驗方法:在瓊脂斜面培養(yǎng)物上或*菌落上滴加試劑1~2滴,陽性者Kovacs氏試劑呈粉紅色~深紫色,Ewing氏改進試劑呈藍色。陰性者無顏色改變。應在數分鐘內判定試驗結果。
注意事項:
(1)鹽酸二甲基對苯撐二胺溶液容易氧化,溶液應裝在棕色瓶中,并在冰箱內保存,如溶液變?yōu)榧t褐色,即不宜使用。
(2)鐵、鎳鉻絲等金屬可催化二甲基對苯撐二胺呈紅色反應,若用它來挑取菌苔,會出現假陽性,故必須用白金絲或玻璃棒(或牙簽)來挑取菌苔。
(3)在濾紙上滴加試劑,以剛剛打濕濾紙為宜,如濾紙過濕,會防礙空氣與菌苔接觸,從而延長了反應時間,造成假陰性。
3、過氧化氫酶的測定
過氧化氫酶又稱接觸酶,能催化過氧化氫分解水和氧。
1.試劑:3-10%過氧化氫(H2O2)
2.菌種培養(yǎng):將測試菌種接種于合適的培養(yǎng)基斜面上,適溫培養(yǎng)18-24h。
3.試驗方法:取一干凈的載波片,在上面滴1滴3-10%的H2O2,挑取1環(huán)培養(yǎng)18-24h的菌苔,在H2O2溶液中涂抹,若有氣泡(氧氣)出現,則為過氧化氫酶陽性,無氣泡者為陰性。也可將*直接加入斜面上,觀察氣泡的產生。
4.注意事項:過氧化氫酶是1種以正鐵血紅素作為輔基的酶,所以測試菌所生長的培養(yǎng)基不可含有血紅素或紅血球。
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