山羊白介素4(IL-4)ELISA試劑盒（BD）

操作過(guò)程中可能出現(xiàn)的問(wèn)題和解決方法：

山羊白介素4(IL-4)ELISA試劑盒（BD）為什么ELISA試劑盒出現(xiàn)白板，陽(yáng)性對(duì)照不顯色？

1、未加A、B顯色液——不要漏加A液和B液

2、洗滌液配制有誤——請(qǐng)按說(shuō)明書(shū)所示稀釋倍數(shù)配制

3、未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入——注意不要漏加

4、終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂?mdash;—每次加液前均應(yīng)看清標(biāo)簽

為什么ELISA試劑盒顯色淡，靈敏度偏低？

1、試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，溫度太高——盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫

2、試劑盒未充分平衡——試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開(kāi)盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。

3、培養(yǎng)箱溫度不足37℃——注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應(yīng)板后盡量減少開(kāi)啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意

4、保溫時(shí)間不足——校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)

5、洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增加——按說(shuō)明書(shū)要求保留洗滌時(shí)間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)

6、移液器吸液量不足，吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔——校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密，吸嘴內(nèi)壁要清潔，一次性使用

7、蒸餾水水質(zhì)有問(wèn)題——使用新鮮合格的蒸餾水

8、底物作用時(shí)間不足——準(zhǔn)確定時(shí)

山羊白介素4(IL-4)ELISA試劑盒（BD）為什么ELISA試劑盒重復(fù)性不佳?

1、樣品數(shù)量多少不一，加樣時(shí)間有長(zhǎng)有短——重復(fù)某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與*次接近

2、保溫時(shí)間不*，洗滌條件不*，操作人員不*——重復(fù)測(cè)定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持*，以排除這些因素造成的不*的可能性

3、加樣量不*——樣品稀釋前應(yīng)充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴

為什么ELISA試劑盒背景深，全部呈有色,臨界對(duì)照OD值超出規(guī)定范圍？

1、洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留——濃縮洗液準(zhǔn)確配制；10倍濃縮洗滌液如有結(jié)晶則應(yīng)讓結(jié)晶于室溫全部溶解后再量取稀釋；充分洗滌，*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染

2、樣品污染——樣品應(yīng)新鮮采集，或低溫保存，防止污染

3、培養(yǎng)箱溫度超過(guò)37℃或反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)——調(diào)整培養(yǎng)箱溫度，準(zhǔn)確定時(shí)

4、吸嘴重復(fù)使用，未洗凈或消毒不*——吸嘴盡可能一次性使用

5、蒸餾水被污染——使用新鮮蒸餾水

6、酶等試劑混用——不同批號(hào)試劑勿混用

7、一次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本量過(guò)多，加樣時(shí)間太長(zhǎng)，導(dǎo)致實(shí)際反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)——合理安排實(shí)驗(yàn)，避免幾塊酶標(biāo)板同時(shí)加樣.

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