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更新時間:2018-04-05 20:23:27瀏覽次數(shù):104次
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豬纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒由上海美旋生物科技有限公司專業(yè)供應(yīng)
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豬纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒用途: 定量檢測細(xì)胞液、體液、組織、血清、血漿等標(biāo)本中豬纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒含量。 注:本公司所有產(chǎn)品僅用于科研,不得用于臨床,詳細(xì)信息請我司銷售客服,同時歡迎您詢價或索取說明書,詢價留言表(↓↓↓)、、在線客服、發(fā)送電子郵件均可,美旋生物是專業(yè)的高質(zhì)量Elisa試劑盒供應(yīng)商,請您放心購買!
豬纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒 操作方法:
一、雙抗體夾心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
二、間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;
6.zui后一遍用DDW洗滌。
其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
豬纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒標(biāo)本收集:
血清:全血標(biāo)本于室溫放置2小時或4℃后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。血漿:抗凝劑*使用EDTA,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂標(biāo)本。其它生物標(biāo)本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測標(biāo)本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。標(biāo)本收集后若不及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi),避免反復(fù)凍融,6個月內(nèi)進(jìn)行檢測,4℃保存的應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。 如果樣本中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值,請根據(jù)實際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù))。
酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL,200-1000μL37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水。
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