氮代謝系列_硝酸還原酶(NR)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
NR( EC 1.7.1.3)廣泛存在于植物中,是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶,也是誘導(dǎo)酶,對作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。
氮代謝系列_硝酸還原酶(NR)測試盒
測定原理:
NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD+ +H 2 O;產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的紅色偶氮化合物在 540 nm 有大吸收峰,可用分光光度法測定。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
誘導(dǎo)劑儲備液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體10mL×1瓶,-20℃保存。
試劑二:液體5mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:液體6mL×1瓶,4℃保存(如出現(xiàn)結(jié)晶析出,60℃-90℃水浴溶解后使用);
試劑四:液體6mL×1瓶,4℃保存。
試劑五:標(biāo)準(zhǔn)儲備液1mL,-20℃保存。
誘導(dǎo)劑應(yīng)用液的配制:用時將誘導(dǎo)劑儲備液稀釋10倍,即取10mL誘導(dǎo)劑儲備液加90mL蒸餾水,充分混勻。
0.1umol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液的配制:用時將試劑五稀釋100倍,即取 0.1ml試劑五加9.9mL蒸餾水,充分混勻。
樣本前處理:
動植物組織樣品的前處理:
(1)取適量誘導(dǎo)劑于燒杯中,將新鮮標(biāo)本洗凈,濾紙吸干,放入誘導(dǎo)劑應(yīng)用液中(淹沒即可),浸泡2h,取出樣本,濾紙吸干。
(2)按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
注意:
1、 建議使用新鮮沒有冷凍過的樣本。
2、 一般不
要誘導(dǎo)處理,預(yù)測定結(jié)果沒有活性(A測定≤A對照管)則需要誘導(dǎo)處理。