氧化與抗氧化系列_多功能氧化酶(MFO)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
多功能氧化酶又稱混合功能氧化酶,可產(chǎn)生降解反應(yīng),可使原化學(xué)物質(zhì)變?yōu)榈投镜幕驘o毒的物質(zhì)從體內(nèi)排出;還可產(chǎn)生激活反應(yīng),可使原化學(xué)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為具有親電子性質(zhì),導(dǎo)致毒性增強(qiáng),成為致突變物或終致癌物。近年來對混合功能氧化酶系與外源性化學(xué)物質(zhì)相互作用的深入研究,對于從分子生物學(xué)水平上進(jìn)一步了解外源性化學(xué)物質(zhì)的毒作用具有重要意義。
氧化與抗氧化系列_多功能氧化酶(MFO)測試盒
測定原理:
MFO催化對硝基苯甲醚,在400nm下有特征吸光值。
自備用品:
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水、氯仿。
試劑組成和配制:
提取液:液體120mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體24mL×1瓶,4℃避光保存;
試劑二:粉劑×3管,-20℃保存;臨用前取一管加入1.5mL水溶解,現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑三:液體24mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體64mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?br/>
按照組織質(zhì)量(g):提取液(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm。
2、在EP管中依次加入如下試劑
試劑名稱(μL)測定空白
試劑一200200
試劑二4040
提取液160360
樣本200
混勻,37℃水浴30min
試劑三200200
分別加入1000μL氯仿,充分混勻萃取,靜置10min,取下層氯仿層0.6mL至新的EP管中。再加入試劑四0.6mL,充分混勻萃取,取上層水相0.2mL于96孔板中,400nm下測定吸光值A(chǔ)測定與A空白,△A=A測
定-A空白??瞻坠苤恍铚y一管。