微量法--總抗氧化能力(ABTS法)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
微量法--總抗氧化能力(ABTS法)測試盒
研究意義:
測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測血漿、血清、唾液尿液等各種體液,細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。
測定原理:
ABTS 法是使用常見泛的間接檢測方法,可用于親水性和親脂性物質(zhì)抗氧化能力測定。ABTS經(jīng)氧化后生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色陽離子自由基 ABTS+,能溶于水相或酸性乙醇介質(zhì)中,在 734nm 處有大吸收。被測物質(zhì)加入 ABTS+溶液后,所含抗氧化成分能與 ABTS+發(fā)生反應(yīng)而使反應(yīng)體系褪色。在 734nm 檢測吸光度的變化,并以 Trolox 作為對照體系量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。
自備實(shí)驗(yàn)用品:
恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96 孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體 120mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 24mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:粉劑×2 瓶,4℃避光保存。
樣品的制備:
(1)血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品
血漿(制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝)4℃,5000rpm 離心
10min,取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定,也可以-80℃凍存(不宜超過
30d)后再測定。
(2) 組織樣品
按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
(3) 細(xì)胞樣品
按照細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎(功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
操作步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長至 734nm。
2、 工作液的配置:臨用前取試劑二一瓶,加入 11mL 試劑一,震蕩混勻 20min 后,靜置,
取上清使用。(注意,現(xiàn)配現(xiàn)用)
3、操作表(在 EP 管中反應(yīng))