PCR-ELISA端粒酶檢測法
閱讀：435發(fā)布時間：2011-4-22
端粒是真核生物染色體末端的特異DNA-蛋白結構，端粒DNA是一系列重復的富含G的DNA序列，這一序列在生物進化中有高度的保守性（人重復序列為TTAGGG）。已確認端粒在保護基因組DNA不被降解、防止染色體有害的結合（如染色體末端融合、重排、染色體移位和染色體缺失）中起重要作用。
由于DNA聚合酶不能復制線性DNA的zui末端，多數(shù)正常體細胞的端粒末端每經(jīng)一個復制循環(huán)就進行性縮短。這一現(xiàn)象在體內和體外都得到證實，并且可能與真核生物的正常體細胞有限的繁殖能力有關。
這一活性可能在與細胞衰老有關的情況中起作用。與體細胞相對照，生殖細胞是永生性的，它需要為將來器官形成保存全部的遺傳信息。因此它必須對抗端?？s短。這一工作通過在基因組染色體的末端添加新的端粒重復序列而完成。
端粒酶是一種核糖核蛋白，它們用自身的RNA成份的互補序列作模板，催化TTAGGG重復序列加到染色體末端。在大多數(shù)永生性細胞株和腫瘤細胞株中也可見端粒酶活性的表達。端粒酶反應超越了細胞的增殖限制，這可能是惡性腫瘤發(fā)生的一個先決條件。
傳統(tǒng)的端粒酶研究方法是以探針延伸為基礎測定端粒酶活性。由于需要大量的樣品材料，且檢驗靈敏度受局限,這一方法已被端粒重復擴增法（omericRepeatAmplificationProtocol,TRAP）所取代。
標準的TRAP測定是通過PCR擴增端粒酶反應的產(chǎn)物，使用放射性標記，經(jīng)凝膠電泳后，通過放射自顯影顯示結果。
這里介紹使用非放射性標記的檢測端粒酶的新方法：活性光密度酶聯(lián)免疫測定法。這種方法具有如下特點：安全，無需使用放射性同位素一步反應，使用即用的混合物使端粒酶介導的引物延伸和PCR擴增可在一個試管中進行。應用廣泛，擴增后可適用于不同分析法。靈敏，與放射性同位素TRAP測定相當?？煽?，準確、重復性好?？焖?，6-8小時得到結果。
