豬偽狂犬病毒gE蛋白酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍： 96T
6ng/L - 160ng/L
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中偽狂犬病毒gE 蛋白含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬偽狂犬病毒gE 蛋白水平。用純化的豬偽狂犬
病毒 gE蛋白抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入偽狂犬病毒gE
蛋白，再與HRP 標(biāo)記的偽狂犬病毒gE蛋白抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)
過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)
化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的偽狂犬病毒gE 蛋白呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm
波長下測(cè)定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豬偽狂犬病毒gE蛋白濃度。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(320ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
160ng/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
80ng/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40ng/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20ng/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ng/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同) 、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl， 待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測(cè)樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色) 。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值) 。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié)：
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式， 將樣品的OD值代入方程式， 計(jì)算出樣品濃度， 再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值) ，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定，計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5) 。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月
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