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細(xì)胞有絲分裂指數(shù)分析試劑盒細(xì)胞凋亡與增殖
貨號 | CS-C6107 | 貨期 | 1~3天 |
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規(guī)格 | 20T | 英文名稱 | Ki67 cell proliferation Detection Kit |
用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
細(xì)胞生物學(xué)研究的常用技術(shù)有哪些:
1.顯微技術(shù):包括顯微觀察,顯微操作.
2細(xì)胞組分分析技術(shù):離心分離技術(shù),生物大分子定位技術(shù),定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù).
3.細(xì)胞工程:細(xì)胞培養(yǎng)。
Ki67細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)Ki67 通常通過標(biāo)記抗Ki67 的抗體(FITC 綠色熒光)和DNA 染料碘化丙啶(PI,紅色)而利用流式細(xì)胞儀檢測來實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞周期的檢測。
操作方法
1. 在適的環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 除去培養(yǎng)液,用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白處理和收集細(xì)胞,離心,(注意1)保證每管細(xì)胞數(shù)在106 個。
4. 用0.3 ml PBS 輕輕的重懸細(xì)胞, 然后慢慢加入0.7 ml 預(yù)冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混勻。在4°C 至少1h。(注意2)
5. 沉淀細(xì)胞,吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗細(xì)胞2 次。
7. 用100μl 抗體孵育液(0.5% Tween-20/1%BSA/PBS)重懸細(xì)胞,加入1ul Ki67 抗體(1μg/106 cells),室溫孵育1 小時。
8. 離心收集細(xì)胞,用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。
9. 離心收集細(xì)胞,用50μl 抗體孵育液重懸,加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC,室溫孵育30 分鐘。離心收集細(xì)胞,150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有終濃度為10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS(pH7.4)重懸細(xì)胞。
11. 避光使細(xì)胞在室溫下孵育20min 后,離心收集細(xì)胞,150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后,轉(zhuǎn)移至流式檢測管中重懸。
產(chǎn)品名稱 | Ki67細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法) | 貨號 | CS-C6107 |
英文名稱 | Ki67 cell proliferation Detection Kit | 規(guī)格 | 20T |
Ki67 蛋白是細(xì)胞周期相關(guān)的一種核蛋白,主要表達(dá)于細(xì)胞增殖分裂的各個時期(G1、S、G2 和M 期),但是在靜息的細(xì)胞(G0 期)中不表達(dá)。Ki67 常用于檢測腫瘤細(xì)胞的生長指數(shù)(免疫組化法利用計(jì)算細(xì)胞總數(shù)中的Ki67 陽性細(xì)胞數(shù)所占比例得到Ki67 指數(shù))。
注意事項(xiàng):
1. 本試劑盒的檢測試劑中含有螢光素酶,反復(fù)凍融會導(dǎo)致其逐漸失活。盡管經(jīng)測試本試劑反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,為取得良好的使用效果,*次解凍后可適當(dāng)分裝保存。反復(fù)凍融過程中,可能會導(dǎo)致檢測試劑中出現(xiàn)少量沉淀,此時宜平衡至室溫,并盡量溶解。如仍有殘留的不溶物,可以離心去除后使用,經(jīng)測試不會影響后續(xù)的檢測效果。
2. 檢測時需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相鄰孔之間會產(chǎn)生相互干擾。
3. 使用說明中提供了檢測ATP標(biāo)準(zhǔn)品的方法,實(shí)際檢測細(xì)胞活力時通常并不需要檢測ATP標(biāo)準(zhǔn)品。
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