丙二醛（MDA）終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 主要用途 丙二醛（MDA）終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)TBARS（硫代巴比妥酸反應(yīng)物）技術(shù)，檢測(cè)與之反應(yīng)的丙二醛，其產(chǎn)物丙二醛雙硫代巴比妥酸加合物，在分光光度儀下，檢測(cè)其吸光峰值的變化，即采用比色法測(cè)定樣品中總丙二醛含量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種動(dòng)物、人體等細(xì)胞、組織、血液、體液、培養(yǎng)液丙二醛的含量檢測(cè)。廣泛用于細(xì)胞氧化應(yīng)急研究，特別是脂質(zhì)過(guò)氧化的分析。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，重復(fù)性好。 技術(shù)背景 脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)（lipid peroxidation；LPO）是動(dòng)物和植物細(xì)胞損傷的一種機(jī)制，也是評(píng)價(jià)細(xì)胞和組織氧化應(yīng)急的標(biāo)志。含有兩個(gè)或以上雙鍵（double bond）的多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated Fatty Acid）對(duì)自由基以及其它活性氧化族高度敏感，導(dǎo)致產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧自由基LOO＋（lipid peroxyl radical），使脂類(lèi)氧化（lipid oxidation）。脂質(zhì)過(guò)氧化自由基LOO＋同時(shí)通過(guò)攻擊分子內(nèi)雙鍵，經(jīng)環(huán)化、裂解形成環(huán)狀內(nèi)過(guò)氧化物（cyclic endoperoxide），例如丙二醛（malondialdehyde；MDA）。作為脂質(zhì)過(guò)氧化性低分子量終端產(chǎn)物之一的丙二醛，廣泛用于脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的指標(biāo)。在丁羥甲苯（Butylated Hydroxytoluene；BHT）和EDTA的參與幫助減少干擾性脂類(lèi)氧化的情況下，丙二醛與硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid；TBA）進(jìn)行反應(yīng)，產(chǎn)生丙二醛雙硫代巴比妥酸加合物（MDA－TBA2），通過(guò)分光光度儀（532nm波長(zhǎng)）來(lái)定量分析丙二醛的含量，其反應(yīng)方式為： malondialdehyde +2 thiobarbituric acid → MDA－TBA2 產(chǎn)品內(nèi)容 抗干擾液（Reagent A） 500微升 萃取液（Reagent B） 1.25毫升 反應(yīng)液（Reagent C） 5管 補(bǔ)充液（Reagent D） 10毫升 稀釋液（Reagent E） 1.5毫升 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份 保存方式 保存在4℃冰箱里，抗干擾液（Reagent A）和反應(yīng)液（Reagent C）避免光照，并密封；萃取液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月 用戶(hù)自備 恒溫培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育 酶標(biāo)板：用于比色的容器 酶標(biāo)儀：用于樣品比色分析 實(shí)驗(yàn)步驟 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒中的反應(yīng)液（Reagent C） 置入冰槽里。移取250微升稀釋液（Reagent E）到 反應(yīng)液（Reagent C）管里，渦旋混勻，標(biāo)記為反應(yīng)工作液（10次操作量）。同時(shí)設(shè)定好酶標(biāo)儀（溫度為25℃）：波長(zhǎng)532nm，并置零。然后進(jìn)行下列操作。 1．準(zhǔn)備好1個(gè)96酶標(biāo)板孔，并做好相應(yīng)標(biāo)記：背景對(duì)照和樣品 2．分別移取140微升補(bǔ)充液（Reagent D） 3．分別加入10微升抗干擾液（Reagent A） 4．分別加入50微升補(bǔ)充液（Reagent D）或待測(cè)樣品（注意：總量為1至2毫克總蛋白） 5．用槍頭混勻 6．分別加入25微升萃取液（Reagent B） 7．用槍頭混勻 8．分別加入25微升反應(yīng)工作液 9．輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)板，混勻 10．放進(jìn)60℃恒溫培養(yǎng)箱，孵育60分鐘 11．放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè) 12．樣品實(shí)際讀數(shù)：（樣品讀數(shù)－背景對(duì)照讀數(shù)） 13．計(jì)算樣品總濃度 [樣品實(shí)際讀數(shù)X樣品稀釋倍數(shù)X 0.25（毫升，測(cè)定容量）]÷[0.05（樣品容量，毫升）X 156（毫摩爾吸光系數(shù)）X 0.6]＝微摩爾/毫升÷（樣品蛋白濃度）毫克/毫升＝微摩爾/毫克 注意事項(xiàng) 1．本產(chǎn)品為50次（96孔板）操作 2．操作時(shí)，須戴手套 3．萃取液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全 4．反應(yīng)液（Reagent C）為固體，避免在室溫下放置；配制后，有效期1周 5．抗干擾液（Reagent A）和反應(yīng)液（Reagent C）避免光照，并密封 6．本產(chǎn)品檢測(cè)敏感度可達(dá)0.05微摩爾丙二醛 7．50微摩爾的過(guò)氧化氫會(huì)干擾檢測(cè)（使丙二醛減少13％）；而蔗糖和果糖則不影響檢測(cè) 8．如果樣品含有過(guò)高的蛋白成分，建議進(jìn)行樣品去蛋白處理 9．如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低，可以調(diào)整樣品濃度 10．正常樣品的丙二醛濃度相當(dāng)?shù)?，約在皮摩爾水平，即10至100皮摩爾/毫克蛋白 11．本公司提供系列丙二醛檢測(cè)試劑產(chǎn)品 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定 2．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感