小鼠脫碘酶（ID）ELISA試劑盒ELISA試劑盒的基本原理
就是將抗原抗體固定到特定的載體上進行反應，并通過酶催化底物發(fā)生化學變化將抗原抗體反應通過顏色的形式顯現(xiàn)出來。
（1）將抗原抗體反應固相化：即試驗中的包被環(huán)節(jié)，使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團可以無選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破壞蛋白分子結構，保持其生物學特性和免疫學活性；
（2）封閉：固相吸附蛋白是非特異性的，在包被目的免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力，為了保障抗原抗體反應的特異性，因此，包被剩余的固相表面應該用抗原抗體反應無關蛋白封閉。一般認為牛血清白蛋白是zui為理想的封閉劑，也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
（3）抗原抗體反應：抗原或抗體在適當?shù)慕橘|下可進行特異的抗原抗體反應。 （4）酶反應：酶可以通過共價鍵與抗原或抗體連接形成結合物，當抗原抗體反應的時候，被檢測靶目標中也結合了酶分子。
（5）ELISA試劑盒底物反應：結合在抗原抗體中的酶分子，可以促使底物發(fā)生顏色反應，檢測人員可以裸眼觀察，可以通過顏色來判定是否有免疫反應的存在，通過顏色的深淺判斷標本中相應抗原或抗體的含量，也可借用酶標儀在適當?shù)牟ㄩL讀取吸光度值。

小鼠脫碘酶（ID）ELISA試劑盒ELISA試劑盒試劑組成：包被平底微孔板,酶結合物,生物素,標準品,顯色劑A,顯色劑B,終止液,濃縮洗滌液(100倍稀釋)。

自備物品：1.酶標儀(盡量提前預熱)
2.微量加液器、吸頭
3.蒸餾水或去離子水以及濾紙

ELISA試劑盒注意事項
1.試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2．加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大，否則將會導致不同的預孵育時間，從而影響實驗的準確性以及重復性；一般加樣時間控制在10分鐘內，如果樣本數(shù)量過多，可使用多道移液器。
3.孵育：樣品要在密閉的容器內進行孵育，嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。
4.洗滌：洗滌過程中反應孔中的殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響zui后的酶標儀讀數(shù)。
5.反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，10分鐘左右)，如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應。
6.建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應的稀釋倍數(shù)。
7.建議使用本試劑盒時先做預實驗(即先做標準曲線，試用幾個標本)，如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經銷商，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調換，但概不承擔產品本身以外的任何損失。

ELISA試劑盒操作步驟
1. 取出試劑盒，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實驗過程應在室溫(20-25℃)內進行。
2. 取出酶標板，按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對照加入50μl的蒸餾水；
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素；(不含空白對照孔,切忌：生物素只加樣品孔！)
5. 在各孔中加入100μl的酶標記溶液；(不含空白對照孔)
6. 將酶標板用封口膠密封后，37℃孵育反應 1小時；(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7. 充分清洗酶標板3-5次，保持各孔有充足的水壓；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
8. 酶標板洗滌后用吸水紙*拍干；
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；(不含空白對照孔)
10. 20-25℃下避光反應15分鐘；
11.各孔加入50μl終止液，終止反應；

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