小鼠胰島素自身抗體（IAA）ELISA試劑盒●規(guī)格： 96T/48T
●反應(yīng)時(shí)間： 1-5h●所需樣本體積： 50-100ul●檢測波長： 450 nm
●用途： For research use only. Not for diagnostic use.●特點(diǎn)：靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好
●服務(wù)：子科生物所有的elisa試劑盒均可免費(fèi)代測，全程Elisa實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)?！襁\(yùn)輸：全國各地快遞免費(fèi)送貨上門，低溫運(yùn)輸，用冰袋加泡沫保溫盒包裝，確保產(chǎn)品運(yùn)輸狀態(tài)下也處于低溫狀態(tài)。

ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
1、已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；
2、酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；
3、酶的底物；
4、陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測定中）；
5、結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；
6、洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；
酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的zui終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

小鼠胰島素自身抗體（IAA）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測定具體步驟：
1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目，并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9；做雙份檢測時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。 
2．將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中，1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。 
3．酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng) 90 分鐘。 
4．反應(yīng)后用自動洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。 不洗。 
5．將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。（TMB 空白顯色孔除 外）。37℃反應(yīng) 60 分鐘。 
6． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次，每次浸泡 1 分鐘左右。 
7．將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入（TMB 空白顯色孔除外）。37℃反應(yīng) 30 分鐘。 
8． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次，每次浸泡 1-2 分鐘左右。 
9．按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液，37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 （注意：顯色時(shí)間供參考，因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異，顯色時(shí)間會有所不同。此時(shí)肉眼可 見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后 3-4 孔差別不明顯）。 
10．按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。 
11．用酶標(biāo)儀在 450nm 測定 O.D.值。

樣品稀釋的一般原則 
用戶須估計(jì)樣品待測因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度 處于 ELISA 試劑盒的檢測范圍。根據(jù)待測因子含量高、中、低的不同，分別采取不同的稀釋方案：
高：指待測因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀釋。297μ ι 樣品稀釋液加 3μ ι 樣品。 
中：指待測因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀釋。225μ ι 樣品稀釋液加 25μ ι 樣品。 
低：指待測因子在 31.2→2000pg/ml。按 1：2 稀釋。100μ ι 樣品稀釋液加 100μ ι 樣品。 
特低：指待測因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋，按每孔 100μ ι 樣品直接加入。

以上方案僅供參考，樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄

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