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大鼠白介素33(IL33)ELISA試劑盒

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更新時間:2016-06-17 11:30:52瀏覽次數(shù):54次

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?產(chǎn)品名稱:大鼠白介素33(IL33)ELISA試劑盒
?英文名稱:Rat Interleukin 33 (IL33) ELISA Kit
?產(chǎn)品規(guī)格:96T(人份)/48T(人份)(單孔檢測分別可以檢測90份樣本,42分樣本,一般都需要留6個孔做標準曲線)。
?檢測方法:酶聯(lián)免疫分析ELISA方法
?有效期: 4 個月(4℃);8 個月(-20℃)。 
?保存方法: 2-8℃(頻繁使用時); -20℃(長時間不用時)。 
?品牌:子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
?質(zhì)量保證:我告訴所有產(chǎn)品均需要經(jīng)過質(zhì)檢通過后,才允許出庫!
?適用范圍:實驗結(jié)果僅供科研參考,不推薦用于臨床診斷結(jié)果。
?ELISA常用的方法:雙抗體夾心法、間接法、競爭法以及BAS-ELISA等,子科生物ELISA產(chǎn)品主要用雙抗體夾心法。

大鼠白介素33(IL33)ELISA試劑盒操作步驟
1、 取出試劑盒,于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實驗過程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進行。
2、 取出酶標板,按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中。
3、空白微孔中加入50μl的樣品,空白對照加入50μl的蒸餾水;
4、 在樣品孔中加入10μl的生物素;(不含空白對照孔,切忌:生物素只加樣品孔!)
5、在各孔中加入100μl的酶標記溶液;(不含空白對照孔)
6、將酶標板用封口膠密封后,37℃孵育反應(yīng) 1小時;(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7、 充分清洗酶標板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)
8、酶標板洗滌后用吸水紙*拍干;
9、各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對照孔)
10、20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘;
11、各孔加入50μl終止液,終止反應(yīng);

結(jié)果判斷
1、30分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值;
2、以O(shè)D值為縱坐標,以標準品的濃度為橫坐標,繪制曲線圖;
3、根據(jù)樣品的OD值查找對應(yīng)的濃度范圍;

標本要求: 
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

大鼠白介素33(IL33)ELISA試劑盒的基本原理
就是將抗原抗體固定到特定的載體上進行反應(yīng),并通過酶催化底物發(fā)生化學(xué)變化將抗原抗體反應(yīng)通過顏色的形式顯現(xiàn)出來。
(1)將抗原抗體反應(yīng)固相化:即試驗中的包被環(huán)節(jié),使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團可以無選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破壞蛋白分子結(jié)構(gòu),保持其生物學(xué)特性和免疫學(xué)活性;
(2)封閉:固相吸附蛋白是非特異性的,在包被目的免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力,為了保障抗原抗體反應(yīng)的特異性,因此,包被剩余的固相表面應(yīng)該用抗原抗體反應(yīng)無關(guān)蛋白封閉。一般認為牛血清白蛋白是zui為理想的封閉劑,也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
(3)抗原抗體反應(yīng):抗原或抗體在適當?shù)慕橘|(zhì)下可進行特異的抗原抗體反應(yīng)。 (4)酶反應(yīng):酶可以通過共價鍵與抗原或抗體連接形成結(jié)合物,當抗原抗體反應(yīng)的時候,被檢測靶目標中也結(jié)合了酶分子。
(5)ELISA試劑盒底物反應(yīng):結(jié)合在抗原抗體中的酶分子,可以促使底物發(fā)生顏色反應(yīng),檢測人員可以裸眼觀察,可以通過顏色來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,通過顏色的深淺判斷標本中相應(yīng)抗原或抗體的含量,也可借用酶標儀在適當?shù)牟ㄩL讀取吸光度值。

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