細(xì)胞名稱:WERI-Rb-1 人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞
培養(yǎng)條件:RPMI-1640 +10% FBS
形 態(tài):懸浮;圓形聚集成葡萄狀
背 景:WERI-Rb-I細(xì)胞株是1974年R.M. McFall 和 T.W. Sery建立的兩株人眼癌細(xì)胞系中的一株。細(xì)胞能在Difco Bacto-Agar中存活但不形成克隆。掃描電鏡顯示在表面囊泡,板狀偽足和微絨毛在數(shù)量上和頻率上的改變。細(xì)胞分化研究,*的動(dòng)物模型和生化評價(jià)都涉及這株細(xì)胞
WERI-Rb-1(人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中,細(xì)胞培增3~6次。細(xì)胞傳代后,一般經(jīng)過三個(gè)階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度,即細(xì)胞群的分裂相數(shù)/100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細(xì)胞可達(dá)3~5%。接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力時(shí)期,稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期),適宜進(jìn)行各種試驗(yàn)。
formazan結(jié)晶的生成量僅與活WERI-Rb-1(人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)數(shù)目成正比(死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失,不能將MTT還原)。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶標(biāo)儀測定490 nm處的光密度OD值,以反映出活細(xì)胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時(shí)都需要避光,用鋁箔紙包好就可以。實(shí)驗(yàn)的時(shí)候一般關(guān)閉超凈臺(tái)上的日光燈來避光,覺得這樣比較好。
1.接種:用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液,以每孔1000-10000個(gè)接種到96孔板,每孔體積200ul.
2.WERI-Rb-1(人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)培養(yǎng):同一般培養(yǎng)條件,培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間)。
3.呈色:培養(yǎng)3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續(xù)孵育4小時(shí),終止培養(yǎng),小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液,對于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO,振蕩10分鐘,使結(jié)晶物充分融解。
4.比色:選擇490nm波長,在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值,記錄結(jié)果,以時(shí)間為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo)繪制WERI-Rb-1(人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)生長曲線。
KP-N-NS人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(腦轉(zhuǎn)移)
KU812人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞
KURAMOCHI人卵巢癌細(xì)胞
kyse-140人食管癌細(xì)胞
Kyse450人食管癌細(xì)胞
KYSE-510人食管癌細(xì)胞
L78人肺腺鱗癌細(xì)胞
LAX人肺腺癌
LECPα-1人肺癌細(xì)胞
Li-7人肝癌細(xì)胞
lncap人前列腺癌細(xì)胞
LNCaP clone FGC人前列腺癌細(xì)胞
LoVo人結(jié)腸癌細(xì)胞