一、服務(wù)介紹
透射電子顯微鏡（Transmission Electron Microscope，TEM）是使用的一類電鏡。通過發(fā)射電子束從而穿過超薄的樣品，同時(shí)與樣本相互作用，既而形成圖像。透射電鏡具有分辨率高和放大倍數(shù)高的優(yōu)點(diǎn)。其分辨率為0.1～0.2nm，放大倍數(shù)為幾萬到幾十萬倍。目前透射電鏡已經(jīng)廣泛的應(yīng)用到癌癥研究，病毒學(xué)研究，微生物學(xué)，細(xì)胞學(xué)研究等生物領(lǐng)域。
二、實(shí)驗(yàn)原理
透射電鏡是以電子束透過樣品經(jīng)過聚焦與放大后所產(chǎn)生的物像，投射到熒光屏上或照相底片上進(jìn)行觀察。電子與樣品中的原子碰撞而改變方向，從而產(chǎn)生立體角散射。散射角的大小與樣品的密度、厚度相關(guān)，因此可以形成明暗不同的影像。由于電子易散射或被物體吸收，故穿透力低，必須制備超薄切片(通常為50～100 nm)。要在機(jī)體死亡后的數(shù)分鐘內(nèi)取材，組織塊要小(1mm3以內(nèi))，常用戊二醛和鋨酸雙重固定，包埋介質(zhì)包埋,用超薄切片機(jī)切成薄片，再經(jīng)醋酸鈾和檸檬酸鉛等進(jìn)行電子染色。
三、實(shí)驗(yàn)流程
1.取材
2.固定
3.脫水
4.包埋
5.固化
6.超薄切片機(jī)切片(50-60 nm)
7.3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色
8.透射電鏡觀察，拍片
四、客戶提供
組織塊、細(xì)胞等
五、公司提供
基本實(shí)驗(yàn)步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析
實(shí)驗(yàn)周期：2-3周
六、透射電鏡取材注意事項(xiàng)
取材是電鏡樣品制備的*步，也是十分重要的一步。其操作成功與否直接關(guān)系到整個(gè)實(shí)驗(yàn)的成敗。 為了得到好的結(jié)果，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真做好zui關(guān)鍵的*步取材。因取材不規(guī)范導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗本公司概不負(fù)責(zé)！取材基本要點(diǎn)：快（1min）、冷（4 ℃）、?。?mm 3 ）、凈（無雜質(zhì)）、準(zhǔn)（部位準(zhǔn)確）
動(dòng)植物 組織取材流程及要求：
取材流程： 動(dòng)物麻醉后，快速取出需要檢測(cè)的組織，將組織切成 1 mm 3 左右小塊，固定于 2.5%戊二醛固定液 4℃過夜后快遞。植物組織除麻醉外，其他操作相同。
取材要求：
1.定位準(zhǔn)確：解剖水平的準(zhǔn)確定位誤差應(yīng)≤1mm。注意各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取材區(qū)位及方位的*性和代表性。
2.操作迅速：組織離開活體后，以zui快的速度浸入戊二醛固定液，0.5 min 或zui多2 min。事先準(zhǔn)備好 l 1.5ml 尖頭 P EP 管里面盛滿預(yù)冷的戊二醛固定液。
3.標(biāo)本尺寸大?。航M織塊大小需要在 1 mm 3 左右，樣品太大會(huì)導(dǎo)致樣品固定不充分。（提示：把較大標(biāo)本塊修整成符合要求的顆粒時(shí)，須事先準(zhǔn)備一個(gè)蠟盤，滴入戊二醛固定液，把標(biāo)本浸在液滴中修整，確認(rèn)每個(gè)小標(biāo)本顆粒都包含需要的結(jié)構(gòu)內(nèi)容，用牙簽挑出 3～5 粒標(biāo)本，放入 l 1.5ml 尖頭 P EP 管。）
4．保持低溫環(huán)境：為降低自溶酶活性，在 4℃低溫條件下取材，容器和器械預(yù)冷；將修整好的標(biāo)本塊放入戊二醛固定液后，普通 4℃冰箱保存。細(xì)胞取材流程及要求
取材流程： 細(xì)胞直接刮下，細(xì)胞懸液離心，棄上清，PBS 清洗 2 次，離心成團(tuán)，加入 2.5%戊二醛固定液 4℃過夜后快遞。懸浮細(xì)胞、菌液可直接視為細(xì)胞懸浮液操作。
固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌可直接將菌落挑到 PBS 中，后續(xù)操作*。
取材要求：
1．確認(rèn)細(xì)胞數(shù)量充足（6cm 或 10cm 皿長(zhǎng)滿），離心后在 ep 管中 綠豆大??；
2．新鮮配置的電鏡 2.5%戊二醛固定液，PH 值 7.3-7.4；
3．貼壁細(xì)胞用柔軟細(xì)胞劃子輕輕刮起成細(xì)胞懸液，盡量不要反復(fù)來回刮；
4．把細(xì)胞懸液置入潔凈 l 1.5ml 尖頭 P EP 管；
5．選擇合適的離心速度和時(shí)間離心，一般 1000rpm 至 3000rpm，5min 至 10min(轉(zhuǎn)
速及洗的時(shí)間請(qǐng)根據(jù)具體情況具體分析，比較脆弱敏感的細(xì)胞，盡量低轉(zhuǎn)速、短時(shí)間，
以細(xì)胞離心成團(tuán)為準(zhǔn)！S PBS 洗的時(shí)間過長(zhǎng)，容易造成自噬假陽性)；
6．取細(xì)胞團(tuán)塊，如致密團(tuán)結(jié)即棄上清，注入新鮮 2.5%戊二醛固定液，4℃保存；
提示：
a．取離心好的細(xì)胞團(tuán)塊時(shí)，如細(xì)胞分散，可在離心管中注入約 5ul 血清后再次離心，至 EP 管底部出現(xiàn)致密細(xì)胞團(tuán)塊，即送電鏡室。
b．細(xì)胞大小不同，*離心富集速率和時(shí)間不同。提前檢索文獻(xiàn)，避免反復(fù)離心損傷細(xì)胞。
需要客戶提供的材料 ：
1、按照標(biāo)準(zhǔn)方法取材固定的實(shí)驗(yàn)樣本（固定在戊二醛固定液中的樣品）。
2、透射電鏡實(shí)驗(yàn)登記表，電子版發(fā)送到 biofcen。
樣本儲(chǔ)存運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)：
1、儲(chǔ)存：樣本取材后，4℃保存時(shí)間不超過 1 個(gè)月。
2、運(yùn)輸：泡沫盒+冰袋的方式運(yùn)輸， 樣品用氣泡膜包裹，避免標(biāo)本瓶直接接觸冰塊，固定液充滿 EP 管， 封口膜封口，以免郵寄途中液體滲出。
附表一：固定液配方（本公司有售）
A、 磷酸緩沖液的配方：
a 液：0.2M *貯備液：
Na2HPO4·2H2O
或：Na2HPO4·7H2O
或：Na2HPO4·12H2O
加雙蒸水至
b 液：0.2M *貯備液：
17.81 克
26.83 克
35.82 克
500 毫升
NaH2PO4·H2O 13.8 克
或：NaH2PO4·2H2O 15.61 克
加雙蒸水至 500 毫升
使用時(shí)將 A 液 40.5ml 和 B 液 9.5ml 混合成 0.2 磷酸緩沖液。（PH7.4）
B、 2.5﹪戊二醛固定液的配方：
0.2M 磷酸緩沖液 50ml
25﹪戊二醛溶液 （電鏡） 10ml
加雙蒸水至 100ml
戊二醛溶液zui終濃度：pH 值 7.3-7.4
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