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BNL CL.2細(xì)胞,小鼠胚胎肝細(xì)胞

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上海研盟生物提供美國(guó)ATCC傳代細(xì)胞株“BNL CL.2細(xì)胞,小鼠胚胎肝細(xì)胞"，進(jìn)口來(lái)源，國(guó)內(nèi)保種，活性保證，咨詢(xún)：.

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產(chǎn)品名稱(chēng)：BNL CL.2細(xì)胞,小鼠胚胎肝細(xì)胞

基本特性：
C細(xì)胞數(shù)量：1000000個(gè)細(xì)胞數(shù)
E細(xì)胞檢測(cè)：細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

凍存和復(fù)蘇原則就是：慢凍、快解凍。因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)主要成分還是水，在-20℃時(shí)細(xì)胞中的水結(jié)成冰晶，而與水相比，冰的密度小而體積大，會(huì)造成細(xì)胞器膜、細(xì)胞膜的損傷，這樣很容易導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)蘇失敗。

細(xì)胞名稱(chēng)：BNL CL.2細(xì)胞,小鼠胚胎肝細(xì)胞

組織來(lái)源：肝
培養(yǎng)條件：DMEM +10% FBS
形態(tài)：貼壁；成纖維細(xì)胞樣
背景：在用*和苯*代替*和*的平板上選擇建立了這株細(xì)胞。檢測(cè)表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。

傳代時(shí)間：2-3天 3-5天

傳代比例：1:2~1:3 1:1~1:2

細(xì)胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)安全性：所有細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

問(wèn)：我的實(shí)驗(yàn)是分選癌癥干細(xì)胞進(jìn)行基因組分析，因?yàn)榱魇椒诌x出的腫瘤干細(xì)胞特別少，只有10的4次方，所以選擇了微量的dna和rna提取試劑盒，試劑盒還沒(méi)有到，我打咨詢(xún)技術(shù)顧問(wèn)說(shuō)是把分選的BEL-7404細(xì)胞；人肝癌細(xì)胞離心后棄去液體凍到-80度的冰箱，但是實(shí)驗(yàn)室一位師兄說(shuō)這樣不行，rna會(huì)降解，我實(shí)在不知道該怎么辦了，細(xì)胞應(yīng)該怎么保存，求各位大神指點(diǎn)！還有基因測(cè)序?qū)na和rna要求很高，這么少的細(xì)胞提出的dna和rna可以進(jìn)行測(cè)序嗎？

答：細(xì)胞如果裂解后，RNA在普通環(huán)境下會(huì)很快降解。想要不降解，可以考慮：1.加T-Zol裂解液，-80度保存；2.分選后按細(xì)胞凍存步驟凍存，存于-80度，應(yīng)該能放3-6個(gè)月。

復(fù)蘇方法

1．從液氮罐中取出安剖；有時(shí)因安剖未封嚴(yán)，浸入了液氮，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng)，盡快解凍。

3．剪開(kāi)紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺(tái)上打開(kāi)蓋，用吸管吸出細(xì)胞懸液，裝入離心管中，再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液，吹打使細(xì)胞懸浮。

4．低速離心（500～1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5．加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

技術(shù)相關(guān)問(wèn)答：
1. 如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某一類(lèi)型細(xì)胞沒(méi)有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)?？傊?MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開(kāi)始。2. 何時(shí)須更換培養(yǎng)基？視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。 3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng)，造成細(xì)胞無(wú)法存活。4.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類(lèi)？不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生*的影響。來(lái)自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。

來(lái)源有保障（世界*品牌），狀態(tài)且傳代次數(shù)好，經(jīng)測(cè)試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。每管含有細(xì)胞數(shù)>1000000個(gè)，具有高品質(zhì)、高純度、高穩(wěn)定性等特點(diǎn)，純化技術(shù)保證產(chǎn)品性能。
運(yùn)輸方式：活細(xì)胞運(yùn)輸（T-25 flasks）。
細(xì)胞純度：95%。
細(xì)胞來(lái)源：ATCC等。
包裝：內(nèi)層無(wú)菌自封袋，防壓泡沫盒，外層防壓保溫氣泡袋，說(shuō)明書(shū)。

用途：本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細(xì)胞凍存
１．將細(xì)胞消化下來(lái)，移入離心管離心，棄上清
２．準(zhǔn)備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細(xì)胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)．
放入－２０度冰箱２－４小時(shí)后．再放入－８０度冰箱過(guò)夜，第二天放入液氮罐保存.

，體內(nèi)、外細(xì)胞的差異和分化：

1、差異：細(xì)胞離體后，失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞間的相互影響，生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡相對(duì)穩(wěn)定環(huán)境，日久天長(zhǎng)，易發(fā)生如下變化：分化現(xiàn)象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時(shí)間后衰退死亡；或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性，變成可無(wú)限生長(zhǎng)的連續(xù)細(xì)胞系或惡性細(xì)胞系。因此，培養(yǎng)中的細(xì)胞可視為一種在特定的條件下的細(xì)胞群體，它們既保持著與體內(nèi)細(xì)胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能，也有一些不同于體內(nèi)細(xì)胞的性狀。實(shí)際上從細(xì)胞一旦被置于體外培養(yǎng)后，這種差異就開(kāi)始發(fā)生了。

2、分化：體外培養(yǎng)的細(xì)胞分化能力并未*喪失，只是環(huán)境的改變，細(xì)胞分化的表現(xiàn)和在體內(nèi)不同。細(xì)胞是否表現(xiàn)分化,關(guān)鍵在于是否存在使細(xì)胞分化的條件，如Friend細(xì)胞（小鼠紅白血病細(xì)胞）在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白，血管內(nèi)皮細(xì)胞在類(lèi)似基膜物質(zhì)底物上培養(yǎng)時(shí)能長(zhǎng)成血管狀結(jié)構(gòu)，雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生特異的單克隆抗體，這些均屬于細(xì)胞分化行為。

研盟生物其他優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品：

人胚腎上皮細(xì)胞，HKC
人腎癌細(xì)胞，A498
人腎癌細(xì)胞，769-P
人腎癌細(xì)胞，OS-RC-2
人腎癌Wilms細(xì)胞，G401
人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞，Caki-2
人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞，786-O
人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞，Caki-1
人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞，SW-13
人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞，NCI-H295R
人腎上腺腺瘤細(xì)胞，NCI-H205
人腎上腺癌細(xì)胞，ACHN
人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞，KP-N-NS
人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞，HK-2
人膀胱癌細(xì)胞，5637（HTB-9）
人膀胱移行細(xì)胞癌，J82
人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞，T24