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上海研盟生物科技有限公司
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產(chǎn)品型號
品 牌
廠商性質生產(chǎn)商
所 在 地上海市
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更新時間:2017-11-03 14:38:12瀏覽次數(shù):345次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線上海研盟生物提供美國ATCC傳代細胞株“Caki-1細胞,人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞操作方法",進口來源,國內保種,活性保證,咨詢:.
【友情提示】:產(chǎn)品價格與說明書請?zhí)砑涌头騺黼娫儍r,索要說明書;
注意事項
1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
產(chǎn)品名稱:Caki-1細胞,人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞操作方法
基本特性:
C細胞數(shù)量:1000000個細胞數(shù)
E細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
凍存和復蘇原則就是:慢凍、快解凍。因為細胞內主要成分還是水,在-20℃時細胞中的水結成冰晶,而與水相比,冰的密度小而體積大,會造成細胞器膜、細胞膜的損傷,這樣很容易導致細胞復蘇失敗。
細胞名稱:Caki-1細胞,人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞操作方法
細胞特性
組織來源:腎透明細胞癌皮膚轉移
培養(yǎng)條件:McCoy's 5A +10% FBS
形 態(tài):貼壁;上皮細胞樣
背 景:超微結構中包含許多微絨毛,少許微絲,許多小線粒體,充分發(fā)育的高爾基休和內質網(wǎng),許多脂滴和多層體,次級溶酶體,沒有發(fā)現(xiàn)病毒顆粒。
含量:>1x10的6次方 個/mL
污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
細胞接受后的處理:
1)收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。
2)請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4)如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5)接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們取得。
細胞用途:僅供科研使用。
復蘇方法
1.從液氮罐中取出安剖;有時因安剖未封嚴,浸入了液氮,取出后因安剖內液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應帶有防護眼睛和手套。
2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時搖動,盡快解凍。
3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺上打開蓋,用吸管吸出細胞懸液,裝入離心管中,再補加10ml培養(yǎng)液,吹打使細胞懸浮。
4.低速離心(500~1000轉/分)5分鐘,取上清后再重復用培養(yǎng)液漂洗、離心。
5.加入培養(yǎng)液適當稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。
技術相關問答:
1. 如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基?培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之,*MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始。2. 何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定, 或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。 3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細胞大都無法立即適應, 造成細胞無法存活。4.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產(chǎn)生*的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
來源有保障(世界*品牌),狀態(tài)且傳代次數(shù)好,經(jīng)測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。每管含有細胞數(shù)>1000000個,具有高品質、高純度、高穩(wěn)定性等特點,純化技術保證產(chǎn)品性能。
運輸方式:活細胞運輸(T-25 flasks)。
細胞純度:95%。
細胞來源:ATCC等。
包裝:內層無菌自封袋,防壓泡沫盒,外層防壓保溫氣泡袋,說明書。
用途:本產(chǎn)品只提供給進一步的科研使用,不可應用于治療等其他方面。
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存.
,體內、外細胞的差異和分化:
1、差異:細胞離體后,失去了神經(jīng)體液的調節(jié)和細胞間的相互影響,生活在缺乏動態(tài)平衡相對穩(wěn)定環(huán)境,日久天長,易發(fā)生如下變化:分化現(xiàn)象減弱;形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡;或發(fā)生轉化獲得不死性,變成可無限生長的連續(xù)細胞系或惡性細胞系。因此,培養(yǎng)中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體,它們既保持著與體內細胞相同的基本結構和功能,也有一些不同于體內細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養(yǎng)后,這種差異就開始發(fā)生了。
2、分化:體外培養(yǎng)的細胞分化能力并未*喪失,只是環(huán)境的改變,細胞分化的表現(xiàn)和在體內不同。細胞是否表現(xiàn)分化,關鍵在于是否存在使細胞分化的條件,如Friend細胞(小鼠紅白血病細胞)在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白,血管內皮細胞在類似基膜物質底物上培養(yǎng)時能長成血管狀結構,雜交瘤細胞能產(chǎn)生特異的單克隆抗體,這些均屬于細胞分化行為。
本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備DMEM培養(yǎng)基(DMEM,GIBCO,貨號11965-092),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行,zui后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數(shù)后離心,用血清重懸浮,加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
傳代時間:2-3天 3-5天
傳代比例:1:2~1:3 1:1~1:2
細胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細胞實驗安全性:所有細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
研盟生物其他優(yōu)質產(chǎn)品:
人永生化表皮細胞,HaCaT
人晶體上皮細胞永生系,SRA01/04(HLE)
人胚胎,皮膚,肌肉,M-7
人胚胎,皮膚,肌肉,M-20
人胚胎,皮膚,肌肉,M-22
人皮膚成纖維細胞,HSAS1
人皮膚成纖維細胞,HSAS2
人皮膚成纖維細胞,HSAS3
人皮膚成纖維細胞,HSAS4
人皮膚成纖維細胞,HSF
人胚皮膚成纖維細胞,CCC-ESF-1
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