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上海研盟生物科技有限公司
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所 在 地上海市
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更新時間：2017-11-03 14:30:45瀏覽次數(shù)：187次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線上海研盟生物提供美國ATCC傳代細胞株“ES-2細胞；人卵巢癌透明細胞說明書"，進口來源，國內保種，活性保證，咨詢：.
【友情提示】：產品價格與說明書請?zhí)砑涌头騺黼娫儍r，索要說明書；
產品名稱：ES-2細胞；人卵巢癌透明細胞說明書
細胞特性
形態(tài)特性：上皮細胞樣
生長特性：貼壁生長
特征特性：ES-2細胞系源于一位47歲黑人女性的臨床卵巢透明細胞癌手術標本。該細胞對中低劑量的*，順氯氨鉑，雙氯乙基亞硝脲，表*吡喃葡糖苷等*藥物有一定耐藥性。該細胞少量表達糖蛋白P。
培養(yǎng)條件：McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 10%FBS
傳代方法：1:3傳代,2-3天傳一代
凍存條件：基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
含量：>1x10的6次方 個/mL
污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
基本特性：
C細胞數(shù)量：1000000個細胞數(shù)
E細胞檢測：細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
凍存和復蘇原則就是：慢凍、快解凍。因為細胞內主要成分還是水，在-20℃時細胞中的水結成冰晶，而與水相比，冰的密度小而體積大，會造成細胞器膜、細胞膜的損傷，這樣很容易導致細胞復蘇失敗。
密度超過90%,并且細胞狀態(tài)很好時,則復溫后2個小時需要立即傳代，提供復蘇好的細胞株，貼壁及懸浮細胞形式，細胞狀態(tài)良好，飽滿、光澤度好，*，并提供細胞報價、所需培養(yǎng)基、種屬來源、組織來源、形態(tài)、背景資料等。
細胞接受后的處理：
1）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4）如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5）接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們取得。
細胞用途：僅供科研使用。
ES-2細胞；人卵巢癌透明細胞說明書復蘇方法
1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴，浸入了液氮，取出后因安剖內液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應帶有防護眼睛和手套。
2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍。
3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，再補加10ml培養(yǎng)液，吹打使細胞懸浮。
4．低速離心（500～1000轉/分）5分鐘，取上清后再重復用培養(yǎng)液漂洗、離心。
5．加入培養(yǎng)液適當稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞分裂間期分有3階段
細胞從上一次分裂結束后到下一次分裂開始的一段時間成為分裂間期。分裂間期以細胞內部DNA合成為依據(jù)，又可分為：
1.G1期——DNA合成前期 該期是從上一次細胞周期完成后開始的，剛形成的兩個子細胞，其體積較原有的細胞小。該期特點是物質代謝活躍，迅速合成RNA和蛋白質，細胞體積顯著增大。這一期的主要意義在于為下階段S期的DNA復制作好物質和能量的準備。
細胞進入G1期后，并不是毫無例外地都進入下一期繼續(xù)增殖，在此時可能會出現(xiàn)三種不同前景的細胞：①增殖細胞：這種細胞能及時從G1期進入S期，并保持旺盛的分裂能力。例如消化道上皮細胞及骨髓細胞等； ②暫不增殖細胞或休止細胞：細胞進入G1期后不立即轉入S期，在需要時，如損傷、手術等，才進入S期繼續(xù)增殖。例如肝細胞及腎小管上皮細胞等；③不增殖細胞：此種細胞進入G1期后，失去分裂能力，終身處于G1期，zui后通過分化、衰老直至死亡。例如高度分化的神經(jīng)細胞、肌細胞及成熟的紅細胞等。
2.S期——DNA合成期 S期主要特征是復制DNA，使DNA含量增加一倍，保證將來分裂時兩個子細胞的DNA含量不變。從G1期進入S期是細胞周期的關鍵時刻，只要DNA的復制一開始，細胞增殖活動就會進行下去，直到分裂成兩個子細胞為止。該期中，如果受到某些因素干擾，會影響到DNA的復制，而引起\細胞的變異或分裂異常終止。
3.G2期——DNA合成后期 此期主要為分裂期做準備。這一期DNA合成終止，但合成少量RNA和蛋白質，可能與構成紡錘體的微管蛋白有關
來源有保障（世界*品牌），狀態(tài)且傳代次數(shù)好，經(jīng)測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。每管含有細胞數(shù)>1000000個，具有高品質、高純度、高穩(wěn)定性等特點，純化技術保證產品性能。
運輸方式：活細胞運輸（T-25 flasks）。
細胞純度：95%。
細胞來源：ATCC等。
包裝：內層無菌自封袋，防壓泡沫盒，外層防壓保溫氣泡袋，說明書。
用途：本產品只提供給進一步的科研使用，不可應用于治療等其他方面。
細胞凍存
１．將細胞消化下來，移入離心管離心，棄上清
２．準備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細胞吹打均勻，移入凍存管內．
放入－２０度冰箱２－４小時后．再放入－８０度冰箱過夜，第二天放入液氮罐保存.
，體內、外細胞的差異和分化：
1、差異：細胞離體后，失去了神經(jīng)體液的調節(jié)和細胞間的相互影響，生活在缺乏動態(tài)平衡相對穩(wěn)定環(huán)境，日久天長，易發(fā)生如下變化：分化現(xiàn)象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡；或發(fā)生轉化獲得不死性，變成可無限生長的連續(xù)細胞系或惡性細胞系。因此，培養(yǎng)中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體，它們既保持著與體內細胞相同的基本結構和功能，也有一些不同于體內細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養(yǎng)后，這種差異就開始發(fā)生了。
2、分化：體外培養(yǎng)的細胞分化能力并未*喪失，只是環(huán)境的改變，細胞分化的表現(xiàn)和在體內不同。細胞是否表現(xiàn)分化,關鍵在于是否存在使細胞分化的條件，如Friend細胞（小鼠紅白血病細胞）在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白，血管內皮細胞在類似基膜物質底物上培養(yǎng)時能長成血管狀結構，雜交瘤細胞能產生特異的單克隆抗體，這些均屬于細胞分化行為。
注意事項
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，zui后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
傳代時間：2-3天 3-5天
傳代比例：1:2~1:3 1:1~1:2
細胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細胞實驗安全性：所有細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
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