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熒光素標(biāo)記抗體

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

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更新時(shí)間：2017-07-28 14:44:40瀏覽次數(shù)：258次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

熒光素標(biāo)記抗體廠家提供詳細(xì)的技術(shù)原理,注意事項(xiàng)信息。

詳細(xì)介紹

　　熒光素標(biāo)記抗體技術(shù)原理：
　　目前用于抗體標(biāo)記的熒光素主要有異硫氰酸熒光素(Fluorescein isothiocynate,FITC)或羅達(dá)明(Lissamine rhodamine B200, RB200)。在鹼性條件下FITC的碳酰胺鍵可與抗體賴氨酸的ε氨基共價(jià)結(jié)合，標(biāo)記后的抗體仍保持與相應(yīng)抗原結(jié)合的能力。在熒光燈源紫外線或蘭紫光激發(fā)下產(chǎn)生黃綠色熒光，通過在熒光顯微鏡下觀察或流式細(xì)胞儀分析可對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位或定量的檢測(cè)。
　　熒光素標(biāo)記抗體注意事項(xiàng)：
　?。?）影響標(biāo)記的因素主要有溫度、時(shí)間、pH及熒光素與抗體蛋白的量等。標(biāo)記所需的時(shí)間與溫度呈反比，4℃需12-18h，20-25℃需2-4h；PH低，標(biāo)記慢，但如pH大于10，抗體易變性，故pH以9.0-9.5為宜；抗體蛋白量低標(biāo)記慢，以20mg/ml為宜；熒光素如使用FITC無定型粉末時(shí)，用量可稍大，如為結(jié)晶型，用量則應(yīng)減少。
　?。?）標(biāo)記抗體中如存在2×10-5mg/ml游離熒光素時(shí)即可產(chǎn)生非特異性熒光，故用Sephadex凝膠柱過濾時(shí)，上樣量不宜太多，一般上樣量小于柱床容積的1/2。
　?。?）免疫血清中的白蛋白易與熒光素結(jié)合，在每ml抗體溶液中白蛋白量為6.25×10-2mg/ml時(shí)，即可出現(xiàn)非特異性熒光。故待標(biāo)記的抗體以用純化的抗體為好。
　　（4）半透膜法（Clark 法）適用于小量抗體的標(biāo)記。標(biāo)記效果比直接法均勻，非特異性染色較少，結(jié)合物中游離熒光素含量較低，易于*去除，但該法熒光素用量較大。
　?。?）用過的Sephadex凝膠柱常附有熒光素而難于除盡，可使用0.1mol/L HCl處理0.5h，再依次用蒸餾水、PBS流洗，平衡。
　　用于標(biāo)記的抗體，要求是高特異性和高親和力的。所用抗血清中不應(yīng)含有針對(duì)標(biāo)本中正常組織的抗體。一般需經(jīng)純化提取IgG后再作標(biāo)記。作為應(yīng)符合以下要求：①應(yīng)具有能與蛋白質(zhì)分子形成共價(jià)鍵的化學(xué)基團(tuán)，與蛋白質(zhì)結(jié)合后不易解離，而未結(jié)合的色素及其降解產(chǎn)物易于清除。②熒光效率高，與蛋白質(zhì)結(jié)合后，仍能保持較高的熒光效率。③熒光色澤與背景組織的色澤對(duì)比鮮明。④與蛋白質(zhì)結(jié)合后不影響蛋白質(zhì)原有的生化與免疫性質(zhì)。⑤標(biāo)記方法簡(jiǎn)單、安全無毒。⑥與蛋白質(zhì)的結(jié)合物穩(wěn)定，易于保存。


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