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人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞耐藥亞株

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人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞耐藥亞株
Human Non - small cell lung cancer cell Resistant Sub - strains
貨號(hào)：A549/DDP
價(jià)格：￥1500.0
規(guī)格： 1*10?6?
細(xì)胞介紹
這株細(xì)胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細(xì)胞耐藥亞株。

詳細(xì)介紹

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞耐藥亞株

Human Non - small cell lung cancer cell Resistant Sub - strains

貨號(hào)：A549/DDP

價(jià)格：￥1500.0

規(guī)格： 1*10 6

細(xì)胞介紹
這株細(xì)胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細(xì)胞耐藥亞株。

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞耐藥亞株細(xì)胞特性
1）來(lái)源：肺癌
2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3）含量：>1x106 個(gè)/mL
4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入*使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途：僅供科研使用。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
注意：客戶收到細(xì)胞后按照下面的要求操作：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的。待細(xì)胞長(zhǎng)到 70-80%的匯合度時(shí)，去掉培養(yǎng)液，加入含 500ng/ml DDP藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時(shí)間肯定會(huì)有小部分細(xì)胞懸浮起來(lái)，但是不要緊，通過(guò)換液可以去掉，下面的細(xì)胞待長(zhǎng)滿就可以消化傳瓶了，這時(shí)可以一直用含藥培養(yǎng)液來(lái)消化培養(yǎng)細(xì)胞，一兩代之后可以將藥物濃度提高到 800ng/ml，含藥培養(yǎng)液用于細(xì)胞培養(yǎng)都沒(méi)問(wèn)題的，凍存的時(shí)候就不要在凍存液里面加藥物了。
1）準(zhǔn)備1640培養(yǎng)基(Gibco)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%，添加PS，1%，1~2ug/ml DDP。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。