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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

主營(yíng)產(chǎn)品： 進(jìn)口elisa試劑盒，細(xì)胞株，細(xì)胞系，菌種

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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

聯(lián)系人：: 劉小姐

電話(huà)：: 021-52960952

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售后電話(huà)：: 15000017673

傳真：: 021-57690166

地址：: 上海市閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈

郵編：: 200000

網(wǎng)址：: www.bhsy-e.com/

商鋪：: http://52317.cn/st582730/

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零背景TOPO-TA克隆試劑盒

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型號(hào)
品牌 其他品牌
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所在地 上海市

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更新時(shí)間：2022-06-10 14:13:21瀏覽次數(shù)：223

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【簡(jiǎn)單介紹】

編號(hào)	BJ-F0164547

零背景TOPO-TA克隆試劑盒及公司其它各類(lèi)產(chǎn)品：小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤;M5076
IL5 Others Canine 狗 IL5 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
CM-M009小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
UM-UC-3, 膀胱移行細(xì)胞癌小鼠成纖維細(xì)胞,3T3/e細(xì)胞 J774A1(單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞)
小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC
PRMT5 Others Human PRMT

中文名稱(chēng)：零背景TOPO-TA克隆試劑盒
英文名稱(chēng)：Zero TOPO-TA Cloning Kit
產(chǎn)品規(guī)格：20T
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-F0164547
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長(zhǎng)時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來(lái)，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過(guò)程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。產(chǎn)品介紹：

本試劑盒是用拓?fù)洚悩?gòu)酶（Topoisomerase）高效快速連接DNA片段的原理進(jìn)一步而成，與傳統(tǒng)的T4連接酶相比，具有以下優(yōu)勢(shì)：

1）快速，僅需1-5分鐘即可完成連接反應(yīng)。

2）高效，無(wú)自連現(xiàn)象，陽(yáng)性克隆率接近100%，無(wú)需設(shè)置藍(lán)白斑篩選；

3）操作簡(jiǎn)單，從連接到涂板僅需15-20min。操作過(guò)程省去冰浴、熱激和1h復(fù)蘇等。

4）可連接長(zhǎng)達(dá)10kb目的產(chǎn)物。

產(chǎn)品用途

A尾PCR產(chǎn)物的快速克隆?？寺『?/span>PCR產(chǎn)物的快速測(cè)序【使用M13F/M13R引物】。

pESI-T vector (30ng/μl)——————20μl

1kb control insert(40ng/μl)——————5μl

10×Enhancer——————20μl

儲(chǔ)存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。

使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個(gè)人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級(jí)容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級(jí)容器上用油性記號(hào)筆寫(xiě)明樣本的種類(lèi)、采樣時(shí)間、編號(hào)、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時(shí)也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級(jí)容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級(jí)容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個(gè)二級(jí)容器內(nèi)。二級(jí)容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)注。
將二級(jí)容器擺放在專(zhuān)用運(yùn)輸箱內(nèi)(或疫苗運(yùn)輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專(zhuān)人(2人)運(yùn)送，不得郵寄，最好使用專(zhuān)車(chē)。
采集的標(biāo)本若不能在24小時(shí)內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無(wú)-70℃條件的，需在4℃冰箱短時(shí)間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時(shí)不穩(wěn)定，故長(zhǎng)期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。

注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。