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Soluble mouse E-Selectin ELISA Kit

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

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更新時(shí)間:2018-05-18 10:05:19瀏覽次數(shù):238次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Soluble mouse E-Selectin ELISA Kit
?規(guī)格: 96T
檢測(cè)范圍:156pg/ml→10,000pg/ml
敏感性: <3pg/ml
特異性: 系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無(wú)交叉反應(yīng)。
保存: 2-8℃(頻繁使用時(shí));-20℃(長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí))。
有效期: 6 個(gè)月(4℃);12 個(gè)月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析小鼠血清、血漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清。

詳細(xì)介紹

Soluble mouse E-Selectin ELISA Kit
規(guī)格: 96T
檢測(cè)范圍:156pg/ml→10,000pg/ml
敏感性: <3pg/ml
特異性: 系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無(wú)交叉反應(yīng)。
保存: 2-8℃(頻繁使用時(shí));-20℃(長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí))。
有效期: 6 個(gè)月(4℃);12 個(gè)月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析小鼠血清、血漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清。
Soluble mouse E-Selectin ELISA Kit工作原理
E-Selectin(Endothelial Leukocyte Adhesion Molecule-1, ELAM-1, CD62E), E 選擇素,選擇素家族一
員,是一種分子量 107-115KDa 的細(xì)胞表面糖蛋白。E 選擇素配體在中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、部
分記憶 T 細(xì)胞上表達(dá)。E 選擇素/E 選擇素配體在炎癥時(shí)使中性粒細(xì)胞吸附至血管壁,并沿血管壁
移動(dòng)。此初始反應(yīng)引起 ICAM-1,VCAM-1 更強(qiáng)烈的反應(yīng),zui終使炎癥細(xì)胞進(jìn)入血管外間質(zhì)。ELISA
方法可以檢測(cè)出可溶性的 E-Selectin。本試劑盒所用的標(biāo)準(zhǔn)品為重組小鼠的不含細(xì)胞內(nèi)和跨膜部
分的 E-Selectin,從 1-557 位氨基酸,分子量 85.8KDa。由于糖化結(jié)果,SDS-PAGE 顯示分子量為
150KDa。
所提供的小鼠 E-Selectin ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒(EnzymeLinked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA)。預(yù)先包被的抗體和檢測(cè)相抗體為近 100%純度的親和純化多克隆抗體。檢測(cè)相抗體經(jīng)生物素(biotin)標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS 或 TBS 洗滌。隨后加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過(guò) PBS 或 TBS 的*洗滌后用底物 TMB 顯色。TMB 在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠 E-SELECTIN 呈正相關(guān)。

內(nèi)容

規(guī)格

數(shù)量

預(yù)包被抗E-Selectin 抗體的 96 孔板

96T

1

凍干標(biāo)準(zhǔn)品

10ng/管

2

生物素標(biāo)記

130ul

1

親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物

130ul

1

樣品稀釋液

30ml

1

抗體稀釋液

12ml

1

ABC 稀釋液

12ml

1

TMB 顯色液

10ml

1

TMB 終止液

10ml

1

洗滌緩沖液(25X)

20ml

1

封板膜

 

2

說(shuō)明書(shū)

 

1

需要而未提供的試劑和器材

1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

2. 自動(dòng)洗板機(jī)。

3. 恒溫箱

4. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測(cè)樣品較多時(shí),用多通道移液器。

5. 干凈的試管和 Eppendof 管。

6. 用去離子水將 25X 洗滌緩沖液稀釋 25 倍,成 1X 洗滌緩沖液。

注意事項(xiàng)

1. 使用前 TMB 顯色液應(yīng)為無(wú)色透明溶液,若發(fā)現(xiàn)顏色異常,請(qǐng)及時(shí)與廠家。

2. 用戶在初次使用試劑盒時(shí),應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。

3 要嚴(yán)格避免操作過(guò)程中酶標(biāo)板干燥。干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活。

4. 為免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

5. 禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。

6. 本公司提供的 96 孔酶標(biāo)板是單條可拆型酶標(biāo)板,用戶可按需求使用;剩余的酶標(biāo)板請(qǐng)

 按保存條件貯存。

7. 揭封板膜和覆蓋封板膜時(shí)應(yīng)避免用力過(guò)大導(dǎo)致液體濺出。

洗板方法

手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內(nèi),浸泡 1-2 分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。

自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。

樣品的準(zhǔn)備和保存

樣品如果不立即分析,應(yīng)分裝后冷凍保存,且避免反復(fù)凍融。

細(xì)胞培養(yǎng)上清——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

血清——用干凈試管收集血液,室溫凝固 30 分鐘,離心 1500×g 15 分鐘,收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血,抽血后 30 分鐘內(nèi)離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進(jìn)一步離心 10000×g 10 分鐘,以*清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

細(xì)胞裂解液——對(duì)于貼壁細(xì)胞,去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液,用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常 10 秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。對(duì)于懸浮細(xì)胞,離心收集細(xì)胞,用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液,用槍吹打把細(xì)胞吹散,用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后,10000—14000g 離心 3-5 分鐘,取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

樣品稀釋的一般原則

用戶須估計(jì)樣品待測(cè)因子的含量,決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測(cè)因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測(cè)范圍。根據(jù)待測(cè)因子含量高、中、低的不同,分別采取不同的

稀釋方案:

高——指待測(cè)因子在 20-200ng/ml。一般按 1:100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。

中——指待測(cè)因子在 2-20ng/ml。一般按 1:10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。

低——指待測(cè)因子在 31.2-2000pg/ml。按 1:2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。

特低——指待測(cè)因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋,或按 1:2 稀釋。

操作程序總結(jié):

1. 加樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng) 90 分鐘。不洗。

2. 加生物素標(biāo)記抗體,37℃反應(yīng) 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。

3. 加 ABC,37℃反應(yīng) 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。

4. TMB37℃反應(yīng) 15-20 分鐘。

5. 加入 TMB 終止液,讀數(shù)。

犬 神經(jīng)肽Y NPY neuropeptide Y

犬 神經(jīng)元烯醇化酶 NSE Neuron-specific enolase

犬 腎素 Renin Renin

犬 腎損傷分子1 Kim-1 Kidney injury molecule 1

犬 生長(zhǎng)分化因子15 GDF15 growth differentiation factot15

犬 嗜環(huán)蛋白;親環(huán)素A CyPA cyclophilin A

犬 嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白 ECP eosinophil cationic protein

犬 雙氫睪酮 DHT Dihydro testosterone

犬 糖連抗原153 CA153 CA153

犬 透明質(zhì)酸 HA Hyaluronic acid

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