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Rat RAGE ELISA Kit

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更新時間：2018-05-21 10:37:10瀏覽次數(shù)：185次

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  ELISA試劑盒

檢測試劑盒

肝纖試劑盒

TNF-α試劑盒

大鼠ELISA試劑盒

人白介素6試劑盒

人ELISA試劑盒

植物ELISA試劑盒

兔子ELISA試劑盒

豬ELISA試劑盒

細胞因子試劑盒

小鼠ELISA試劑盒

酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

腫瘤壞死因子檢測試劑盒

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上海聯(lián)邁生物工程有限公司

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產(chǎn)品簡介

Rat RAGE ELISA Kit
規(guī)格： 96T
檢測范圍： 78pg/ml→5,000pg/ml
敏感性：＜2pg/ml
特異性：系統(tǒng)和其它因子無交叉反應(yīng)。
保存： 2-8℃（頻繁使用時）；-20℃（長時間不用時）。
有效期： 6 個月（4℃）；12 個月（-20℃）。
用途：用于體外定量分析大鼠血清、血漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清。

詳細介紹

Rat RAGE ELISA Kit
規(guī)格： 96T
檢測范圍： 78pg/ml→5,000pg/ml
敏感性：＜2pg/ml
特異性：系統(tǒng)和其它因子無交叉反應(yīng)。
保存： 2-8℃（頻繁使用時）；-20℃（長時間不用時）。
有效期： 6 個月(4℃)；12 個月（-20℃）。
用途：用于體外定量分析大鼠血清、血漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清。
Rat RAGE ELISA Kit工作原理
糖基化終產(chǎn)物受體(receptor for advanced glycation endproducts,RAGE)是一種膜蛋白，屬于免疫球
蛋白超家族。它與免疫球蛋白超家族中的 MUC18 糖蛋白、神經(jīng)細胞粘附分子(nerve cell adhesion
molecule,NCAM)及 CD20 胞內(nèi)部分的氨基酸序列高度同源?？扇苄?RAGE(soluble RAGE,sRAGE)
即 RAGE 胞外段，為配體結(jié)合部位，具有 V 型片段緊接兩個 C 型片段的免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)，每個都含有一對保守的半胱氨酸殘基，V型片段還含有兩個與N偶聯(lián)的糖基化位點，這些對于RAGE分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和特異識別配體的功能具有重要意義。
所提供的大鼠 RAGE ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（EnzymeLinked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。預(yù)先包被的抗體和檢測相抗體都是多克隆抗體。檢測相抗體經(jīng)生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應(yīng)后，PBS 或 TBS 洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過 PBS 或 TBS 的*洗滌后用底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠 RAGE 呈正相關(guān)。

內(nèi)容	規(guī)格	數(shù)量
預(yù)包被抗RAGE 抗體的 96 孔板	96T	1
凍干標準品	10ng/管	2
生物素標記	130ul	1
親和素-過氧化物酶復(fù)合物	130ul	1
樣品稀釋液	30ml	1
抗體稀釋液	12ml	1
ABC 稀釋液	12ml	1
TMB 顯色液	10ml	1
TMB 終止液	10ml	1
洗滌緩沖液(25X)	20ml	1
封板膜		2
說明書		1

需要而未提供的試劑和器材

1. 標準規(guī)格酶標儀。

2. 自動洗板機。

3. 恒溫箱

4. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器。

5. 干凈的試管和 Eppendof 管。

6. 用去離子水將 25X 洗滌緩沖液稀釋 25 倍，成 1X 洗滌緩沖液。

注意事項

1．使用前 TMB 顯色液應(yīng)為無色透明溶液，若發(fā)現(xiàn)顏色異常，請及時與廠家。

2．用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。

3 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。

4．為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

5．禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。

6. 本公司提供的 96 孔酶標板是單條可拆型酶標板，用戶可按需求使用；剩余的酶標板請

按保存條件貯存。

7. 揭封板膜和覆蓋封板膜時應(yīng)避免用力過大導(dǎo)致液體濺出。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內(nèi)，浸泡 1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

樣品的準備和保存

樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。

細胞培養(yǎng)上清——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固 30 分鐘，離心 1500×g 15 分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血，抽血后 30 分鐘內(nèi)離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進一步離心 10000×g 10 分鐘，以*清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

細胞裂解液——對于貼壁細胞，去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常 10 秒后，細胞就會被裂解。對于懸浮細胞，離心收集細胞，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打把細胞吹散，用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后，10000—14000g 離心 3-5 分鐘，取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

樣品稀釋的一般原則

用戶須估計樣品待測因子的含量，決定適當?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測范圍。根據(jù)待測因子含量高、中、低的不同，分別采取不同的

稀釋方案：

高——指待測因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。

中——指待測因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。

低——指待測因子在 31.2-2000pg/ml。按 1：2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。

特低——指待測因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋，或按 1：2 稀釋。

操作程序總結(jié)：

1．加樣品和標準品，37℃反應(yīng) 90 分鐘。不洗。

2．加生物素標記抗體，37℃反應(yīng) 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。

3．加 ABC，37℃反應(yīng) 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。

4． TMB37℃反應(yīng) 15-20 分鐘。