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更新時間:2018-06-07 16:58:37瀏覽次數(shù):233次
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液體樣品RNAout本產(chǎn)品是于從液體樣品中提取RNA的純化試劑,它具有下列優(yōu)點(diǎn):
1. RNA回收率達(dá)到90%以上,少能回收到幾十個拷貝的RNA分子。
液體樣品RNAout
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
液體樣品RNAout | 50次 | 690元 |
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本產(chǎn)品是于從液體樣品中提取RNA的純化試劑,它具有下列優(yōu)點(diǎn):
1. RNA回收率達(dá)到90%以上,zui少能回收到幾十個拷貝的RNA分子。
2. 一管式操作,降低了樣品轉(zhuǎn)移過程中造成污染的機(jī)率。
3. 一站式,含有所有成分,用戶只需要提供樣品。
4. 無毒環(huán)保,不需要使用氯,比市場上的同類產(chǎn)品更環(huán)保。不含酚,比市場上的同類產(chǎn)品更安全。
5. 與普通RT-PCR和熒光RT-PCR兼容。
6. 適用于多種液體樣品,包括血清、血漿、腦脊液、淋巴液、細(xì)胞培養(yǎng)液、眼淚、唾液、各種動物分泌液等。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時,變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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