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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時(shí)間:2018-06-13 14:12:22瀏覽次數(shù):350次
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Taq酶抗體 Taq Antibody是Hot Start PCR用抗Taq抗體,其與Taq 酶結(jié)合后抑制DNA聚合酶活性。使用本制品進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí),高溫變性前抗Taq抗體與Taq酶結(jié)合抑制DNA聚合酶活性,能夠在低溫條件下有效抑制引物的非特異性退火及引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增。抗Taq抗體在PCR反應(yīng)初的DNA變性步驟中變性,DNA聚合酶活性恢復(fù),達(dá)到Hot Start PCR效果。使用本
Taq酶抗體
名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
Taq酶抗體 | 500U | 697元 |
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Taq Antibody是Hot Start PCR用抗Taq抗體,其與Taq 酶結(jié)合后抑制DNA聚合酶活性。使用本制品進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí),高溫變性前抗Taq抗體與Taq酶結(jié)合抑制DNA聚合酶活性,能夠在低溫條件下有效抑制引物的非特異性退火及引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增??筎aq抗體在PCR反應(yīng)初的DNA變性步驟中變性,DNA聚合酶活性恢復(fù),達(dá)到Hot Start PCR效果。使用本制品無(wú)需特殊的抗Taq抗體失活處理,可以在常規(guī)PCR反應(yīng)條件下使用。其特點(diǎn)是:Hot Start PCR法進(jìn)行DNA擴(kuò)增。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過(guò)離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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