EZ Mark彩色預(yù)染蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(10-180KD) 分子生物試劑
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更新時間:2018-06-19 16:04:39瀏覽次數(shù):958次
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Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)Klenow 片段(3´→5´exo-)是大腸桿菌 DNA 聚合酶 I 的蛋白水解產(chǎn)物。它保留了DNA 聚合酶活性,但失去了 5´→3´ 外切核酸酶活性。該酶經(jīng)突變(D424A)去除了其 3´→5´ 的外切核酸酶活性。
具體有下列特點:
1. 用隨機引物制備探針
Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-) | 200U | 詢價 |
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Klenow 片段(3´→5´exo-)是大腸桿菌 DNA 聚合酶 I 的蛋白水解產(chǎn)物。它保留了DNA 聚合酶活性,但失去了 5´→3´ 外切核酸酶活性。該酶經(jīng)突變(D424A)去除了其 3´→5´ 的外切核酸酶活性。
具體有下列特點:
1. 用隨機引物制備探針
2. 隨機引物Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)標(biāo)記法
3. 合成 cDNA 第二鏈
4. 誘變反應(yīng)中第二鏈的合成
5. 雙脫氧法 DNA 序列測定(Sanger 法)
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時,變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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