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亮an酸氨基肽酶(LAP)試劑盒,微板法
亮an酸氨基肽酶(LAP)試劑盒,微板法
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【簡單介紹】
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亮an酸氨基肽酶(LAP)試劑盒,微板法
BCA 蛋白含量試劑盒提供一種簡單,快速,耐去污劑(最多 5%)的檢測蛋白質(zhì)濃度 的方法。

亮an酸氨基肽酶(LAP)試劑盒,微板法

亮an酸氨基肽酶(LAP)試劑盒,微板法

一、產(chǎn)品簡介: BCA 蛋白含量試劑盒提供一種簡單,快速,耐去污劑(最多 5%)的檢測蛋白質(zhì)濃度 的方法。由于蛋白質(zhì)能將Cu2+還原成Cu+;BCA可與Cu+結(jié)合生成紫藍(lán)色復(fù)合物,在562nm 處有光吸光值,顏色的深淺與蛋白含量成正比,因此可根據(jù)吸光值測定蛋白質(zhì)濃度。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑 A 液體 50mL×1 4℃保存 依據(jù)實(shí)驗(yàn)用量,臨用前試劑 A:B=50:1 的比例混勻成反應(yīng) mix 試劑 B 液體 1mL×1 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 液體 1.5mL×1 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,則用到該試劑 三、所需的儀器和用品: 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、移液器和蒸餾水。 四、蛋白含量測定: 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)! 1、樣本制備: ① 組織樣本: 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液(提取液可選用酶提取緩沖液、蒸餾水、生理鹽水) 冰浴勻漿,12000rpm,4℃離心 10min,取上清,即待測液。 【注】:依據(jù)研究經(jīng)驗(yàn),一般需將樣本粗提液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進(jìn)行測定,如 10 倍。實(shí)驗(yàn)前可以先選 2 個(gè)樣本測定,摸索確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù)。 ② 細(xì)菌或細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液; 超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次), 12000rpm,4℃離心 10min,取上清,即待測液。 【注】:依據(jù)研究經(jīng)驗(yàn),一般需將樣本粗提液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進(jìn)行測定,如 10 倍。實(shí)驗(yàn)前可以先選 2 個(gè)樣本測定,摸索確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù)。 ③ 液體樣本:澄清無色液體樣品可以直接測定。若渾濁,離心后取上清檢測。 2、上機(jī)檢測: ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長到 562 nm。 反應(yīng) mix 置于 60℃水浴預(yù)熱 30 min僅煮一次即可)。 試劑名稱(μL測定管 空白管(只做一次) 樣本 5 蒸餾水 5 反應(yīng) mix 200 200 混勻,于 60℃保溫 30min,全部轉(zhuǎn)移到 96 孔板, 562nm 處測定吸光值 A,△A= A 測定-A 空白。 【注】:若A1.5,需將樣本用提取液稀釋后再測定。



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