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重組蛋白A/G預(yù)裝柱/填料

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廣州潔特生物過濾股份有限公司

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

通過基因重組技術(shù)，將蛋白A與蛋白G基因重組于同一質(zhì)粒載體中，并在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，得到分子量為50.5KDa的可溶性蛋白A/G。該可溶性蛋白A/G具有四個(gè)IgG結(jié)合位點(diǎn)，來自于蛋白A；和兩個(gè)IgG的結(jié)合位點(diǎn)，來自于蛋白G。因具有上述特性，使得基因工程重組蛋白A/G具有廣泛的IgG的結(jié)合能力，對(duì)各種哺乳類動(dòng)物的IgG都能結(jié)合，使得該產(chǎn)品在IgG的診斷和純化中具有十分廣泛的用途。本產(chǎn)品采用“高配基、......

詳細(xì)介紹

l 產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)

rec-Protein A/G per Sepharose 4FF 比值：4.0-4.5mg rec-Protein A/G per ml Sepharose 4FF

rec-Protein AG分子量：50.5 KDa

每分子rec-Protein G可結(jié)合IgG位點(diǎn)數(shù)：6個(gè)（4個(gè)來自于蛋白A，2個(gè)來自于蛋白G）

rec-Protein A可結(jié)合白蛋白位點(diǎn)數(shù)：無

線性流速：300-500 cm/h

耐壓指數(shù)：≤0.3 MPa（填料）

l 注意事項(xiàng)
請(qǐng)?jiān)趯?shí)驗(yàn)前仔細(xì)閱讀本rProtein A預(yù)裝柱使用說明。同時(shí)，將所要的所有試劑、耗材拿出置于室溫，恢復(fù)至室溫使用。

l 產(chǎn)品保存
產(chǎn)品儲(chǔ)存于2-8℃，保質(zhì)期兩年。

l rProtein A/G-Sepharose 4FF純化IgG抗體步驟

以下方法適用于從血清或腹水中純化IgG抗體，不同來源的IgG與rProteinA/ G的結(jié)合能力不同，具體情況請(qǐng)參考表1。

1. 將血清或腹水樣品（推薦上樣量2 mL樣品/mL柱）裝入截留分子量3.5 KDa透析帶中，于4 ℃冰箱中對(duì)1× PBS（pH 7.4）透析過夜；

2. 將rProtein A/G-Sepharose 4FF裝柱固定好，用10倍柱體積1× PBS（pH 7.4）平衡層析柱，建議流速為1 mL/min；

3. 將透析好的樣品從層析柱上端加入，建議流速為1 mL/min，為了獲得更好的抗體結(jié)合效果可將流穿液再上樣，重復(fù)2遍（或者是將樣品1次性加入層析柱后置于搖床上，輕輕搖動(dòng)，結(jié)合30 min）；

4. 樣品結(jié)合后，用20倍柱體積1× PBS(pH 7.4)洗滌層析柱，建議流速為1 mL/min，勿讓層析柱滴干；

5. 洗脫IgG，向?qū)游鲋隙思尤胂疵撘海?00 mM，pH 2.7），用預(yù)先加有100 μL中和緩沖液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱體積，進(jìn)行10 % SDS-PAGE電泳，確定IgG樣品所在管，回收樣品。

6. 加入5倍柱體積再生緩沖液（100 mM，pH 2.0），再加入10倍柱體積ddH2O清洗層析柱。向?qū)游鲋尤?0倍柱體積, 20% Ethanol，于4~8 ℃冰箱。

表1 rProtein A/G 與Ig結(jié)合能力情況

IgG類型	Protein A	Protein G	IgG類型	Protein A	Protein G
人 IgG1	++++	++++	大鼠 IgG2b	-	++
人 IgG2	++++	++++	大鼠 IgG2c	+	++
人IgG3	-	++++	大鼠 IgM	+/-	-
人IgG4	++++	++++	兔 Ig	++++	+++
人IgA	++	-	雞 Ig	-	+
人n IgD	++	-	倉(cāng)鼠 Ig	+	++
人IgE	++	-	豚鼠 Ig	++++	++
人 IgM	++	-	牛 Ig	++	++++
小鼠 IgG1	+	++++	馬	++	++++
小鼠 IgG2a	++++	++++	奶牛	++	++++
小鼠 IgG2b	+++	+++	豬	+++	+++
小鼠 IgG3	++	+++	綿羊	+/-	++
小鼠 IgM	+/-	-	山羊	-	++
大鼠 IgG1	-	+
大鼠 IgG2a	-	++++

表2 rProtein A/G預(yù)裝柱系列產(chǎn)品參數(shù)

特性	rProtein A/G	特性	rProtein A
柱體積規(guī)格	1mL，5mL	填料穩(wěn)定性	＞20純化周期
基質(zhì)組成	4%高交聯(lián)度瓊脂糖	pH穩(wěn)定性	pH 2~11
基質(zhì)平均粒徑	90μm	推薦工作pH范圍	pH 3~10
功能基團(tuán)	rProtein A/G：50.5kDa； IgG結(jié)合位點(diǎn)：6個(gè)	推薦在位清洗pH范圍	pH 2~11
配基密度	≈3mg rProtein A/mL 基質(zhì)	工作溫度	4~40℃
結(jié)合能力	35-50mg人IgG/mL填料	運(yùn)輸條件	20%乙醇浸泡，室溫運(yùn)輸
推薦流速	30~150cm/mL	貯藏條件	20%乙醇條件下， 4~8℃保存